目的:構(gòu)建梅毒螺旋體（Tp）三價(jià)粘附素（Tp0751-Tp0136^N-Tp0435）原核及真核重組菌影（BG）,期望能在BALB/c小鼠體內(nèi)有效誘導(dǎo)特異性體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答,為發(fā)展新型梅毒疫苗奠定基礎(chǔ)。方法:構(gòu)建pET30a-E’-Tp0751-Tpr0136^N-Tp0435原核表達(dá)重組體（E’為菌影錨定蛋白/基因）,轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌（E.coli）中誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白,通過(guò)化學(xué)滲透壓法制備原核重組蛋白菌影（E’-Q-BG,Q=Tp0751-Tpr0136^N-Tp0435蛋白）,檢測(cè)菌影裂解率,瓊脂糖電泳法鑒定菌影,WB鑒定目的蛋白表達(dá)。構(gòu)建pcDNA3.1（+）-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435真核表達(dá)重組體,將其轉(zhuǎn)載入預(yù)先用化學(xué)滲透壓法制備的空菌影JM109中,制備成重組真核菌影（pcD-Q/BG,Q=Tp0751-Tpr0136^N-Tp0435編碼基因）。將菌影中真核重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至鼠源性巨噬細(xì)胞RAW264.7中,48 h后用WB鑒定目的蛋白表達(dá)。將49只雌性... 

【文章來(lái)源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：108 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
常用英文縮寫(xiě)
第1章 前言
第2章 實(shí)驗(yàn)材料
    1. 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    2. 細(xì)胞株、質(zhì)粒、菌株和血清
    3. 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    4. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
第3章 實(shí)驗(yàn)方法
N-Tp0435原核融合表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定'>    3.1 pET30a-E'-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435原核融合表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定
N-Tp0435原核重組融合蛋白的表達(dá)與鑒定'>    3.2 pET30a-E'-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435原核重組融合蛋白的表達(dá)與鑒定
    3.3 化學(xué)滲透壓法制備菌影EBG
N-Tp0435原核重組融合蛋白菌影的制備與鑒定'>    3.4 pET30a-E'-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435原核重組融合蛋白菌影的制備與鑒定
N-Tp0435真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定">    3.5 pcDNA3.1（+）-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
    3.6 真核質(zhì)粒的提取與裝載
    3.7 鼠源性巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)
N-Tp0435真核菌影重組蛋白的WesternBlot鑒定">    3.8 pcDNA3.1（+）-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435真核菌影重組蛋白的WesternBlot鑒定
    3.9 重組菌影免疫活性的檢測(cè)
    3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理
第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
N,Tp0435的PCR擴(kuò)增">    4.1 E’,Tp0751,Tp0136^N,Tp0435的PCR擴(kuò)增
N-Tp0435重組載體菌液PCR的擴(kuò)增'>    4.2 pET30a-E'-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435重組載體菌液PCR的擴(kuò)增
N-Tp0435重組載體雙酶切鑒定與序列分析'>    4.3 pET30a-E'-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435重組載體雙酶切鑒定與序列分析
N-Tp0435原核基因重組蛋白的表達(dá)與鑒定">    4.4 pET30a-E’-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435原核基因重組蛋白的表達(dá)與鑒定
    4.5 化學(xué)滲透壓法制備菌影的鑒定與產(chǎn)率
N-Tp0435重組載體的菌液PCR擴(kuò)增">    4.6 pcDNA3.1（+）-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435重組載體的菌液PCR擴(kuò)增
N-Tp0435重組載體的提取與裝載">    4.7 pcDNA3.1（+）-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435重組載體的提取與裝載
N-Tp0435真核重組蛋白表達(dá)與鑒定">    4.8 pcDNA3.1（+）-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435真核重組蛋白表達(dá)與鑒定
    4.9 重組菌影免疫活性
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄一
附錄二
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
作者攻讀攻讀學(xué)位期間的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3040852