每年全球新發(fā)癌癥病例中5%是由人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）引發(fā)的癌癥（包括女性宮頸癌、陰道癌、男性陰莖癌等）,其中宮頸癌病例一直高居于女性惡性腫瘤疾病的第二位。在國內(nèi),每年據(jù)統(tǒng)計(jì)有將近10萬例之多的宮頸癌病例產(chǎn)生,且發(fā)病越來越趨于年輕化。而99.7%的宮頸癌病例都是因HPV感染所引發(fā)的,所以HPV疫苗的研發(fā)一直是世界各國爭相研究的熱點(diǎn)。目前,默克公司的Gardasil（?）、史克公司的Cervarix（?）為先后上市的兩大宮頸癌疫苗以及默克公司的Gardasil（?）9。這三種疫苗的主要成分均是由HPV的重組病毒樣顆粒（virus-likeparticles,VLPs）構(gòu)成。研究表明一定條件下VLP能夠在體外自組裝,其具有與真病毒顆粒相似的構(gòu)象和近乎相同的中和表位,進(jìn)入機(jī)體后能夠激發(fā)體內(nèi)相應(yīng)的免疫應(yīng)答,預(yù)防HPV病毒的入侵,且VLP不包裹遺傳物質(zhì)DNA不具有相應(yīng)的復(fù)制能力,已被作為主流的HPV疫苗形式。但真核表達(dá)系統(tǒng)帶來昂貴的成本、復(fù)雜的生產(chǎn)工藝以及隨著抗原種類以及劑量增加帶來更多的不良反應(yīng)等問題,迫切需要一類生產(chǎn)成本低廉、安全系數(shù)高、保護(hù)范圍更加廣... 

【文章來源】：廈門大學(xué)福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
第一章 前言
    1 HPV簡介
        1.1 HPV概述
        1.2 HPV病毒學(xué)和分子生物學(xué)
        1.3 HPV分型
        1.4 HPV流行病學(xué)研究
        1.5 HPV生活史 & 感染機(jī)制研究
        1.6 HPV預(yù)防性疫苗研究進(jìn)展
        1.7 HPV結(jié)構(gòu)研究進(jìn)展
        1.8 HPV中和表位研究進(jìn)展
第二章 材料與方法
    1 儀器
    2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 菌株、質(zhì)粒和基因
        2.2 酶、單抗和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.3 工作站和軟件
        2.4 其他試劑
        2.5 常見溶液及試劑盒
    3 方法
        3.1 分子克隆相關(guān)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法
        3.2 蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)表達(dá)和純化方法
        3.3 透射電子顯微鏡觀察樣品
        3.4 低溫電鏡重構(gòu)VLP的三維結(jié)構(gòu)
        3.5 差示量熱掃描實(shí)驗(yàn)
        3.6 分析超離法測定樣品沉降系數(shù)
        3.7 酶聯(lián)免疫吸附分析檢測HPV L1蛋白的抗原性-間接法
        3.8 動(dòng)物免疫及單克隆抗體相關(guān)方法
        3.9 假病毒系統(tǒng)—中和抗體檢測實(shí)驗(yàn)
第三章 結(jié)果與分析
    第一部分: HPV16/35/31結(jié)構(gòu)及親緣關(guān)系分析對(duì)比
        第一部分 小結(jié)
    第二部分: HPV16/35兩型型交叉疫苗研究
        1 表達(dá)載體的構(gòu)建
        2 突變VLP顆粒制備
            2.1 小量蛋白表達(dá)鑒定
            2.2 中量蛋白表達(dá)
            2.3 HPV突變L1蛋白的層析純化
            2.4 突變蛋白組裝
            2.5 分子篩層析分析
        3 突變蛋白VLP顆粒性鑒定
            3.1 HPSEC分析
            3.2 透射電鏡負(fù)染觀察顆粒構(gòu)
            3.3 AUC分析顆粒均一穩(wěn)定性
        4 DSC分析突變蛋白熱穩(wěn)定性
        5 突變VLP抗原性分析
        6 H16/35突變VLP的免疫評(píng)價(jià)
            6.1 初步免疫評(píng)價(jià)
            6.2 劑量依賴免疫評(píng)價(jià)
            6.3 ED50（半數(shù)有效劑量）評(píng)價(jià)
        第二部分 小結(jié)
    第三部分: HPV16/35/31三型型交叉疫苗研究
        1 表達(dá)載體的構(gòu)建
        2 突變VLP顆粒制備
            2.1 小量蛋白表達(dá)鑒定
            2.2 中量蛋白表達(dá)
            2.3 HPV突變L1蛋白的層析純化
            2.4 突變蛋白組裝
            2.5 分子篩層析分析
        3 突變蛋白VLP顆粒性鑒定
            3.1 HPSEC分析
            3.2 透射電鏡負(fù)染觀察顆粒構(gòu)
            3.3 AUC分析顆粒均一穩(wěn)定性
        4 DSC分析突變蛋白熱穩(wěn)定性
        5 H16/35/31突變VLP的免疫評(píng)價(jià)
            5.1 初步免疫評(píng)價(jià)
            5.2 劑量依賴免疫評(píng)價(jià)
            5.3 ED50（半數(shù)有效劑量）評(píng)價(jià)
        第三部分 小結(jié)
    第四部分 討論
        1 型交叉疫苗在HPV疫苗中的應(yīng)用前景
        2 型交叉疫苗免疫評(píng)價(jià)
        3 HPV交叉免疫機(jī)制
        4 HPV結(jié)構(gòu)研究
    第五部分 小結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]兩類重要蛋白的分子動(dòng)力學(xué)模擬及蛋白質(zhì)對(duì)接方法的研究[D]. 孟烜宇.吉林大學(xué) 2011

碩士論文
[1]消減免疫法篩選HPV型間雜合顆粒特異單克隆抗體及其表位研究[D]. 陸劍.廈門大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3036426