每年全球新發(fā)癌癥病例中5%是由人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）引發(fā)的癌癥（包括女性宮頸癌、陰道癌、男性陰莖癌等）,其中宮頸癌病例一直高居于女性惡性腫瘤疾病的第二位。在國內,每年據統(tǒng)計有將近10萬例之多的宮頸癌病例產生,且發(fā)病越來越趨于年輕化。而99.7%的宮頸癌病例都是因HPV感染所引發(fā)的,所以HPV疫苗的研發(fā)一直是世界各國爭相研究的熱點。目前,默克公司的Gardasil（?）、史克公司的Cervarix（?）為先后上市的兩大宮頸癌疫苗以及默克公司的Gardasil（?）9。這三種疫苗的主要成分均是由HPV的重組病毒樣顆粒（virus-likeparticles,VLPs）構成。研究表明一定條件下VLP能夠在體外自組裝,其具有與真病毒顆粒相似的構象和近乎相同的中和表位,進入機體后能夠激發(fā)體內相應的免疫應答,預防HPV病毒的入侵,且VLP不包裹遺傳物質DNA不具有相應的復制能力,已被作為主流的HPV疫苗形式。但真核表達系統(tǒng)帶來昂貴的成本、復雜的生產工藝以及隨著抗原種類以及劑量增加帶來更多的不良反應等問題,迫切需要一類生產成本低廉、安全系數高、保護范圍更加廣... 

【文章來源】：廈門大學福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：109 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
第一章 前言
    1 HPV簡介
        1.1 HPV概述
        1.2 HPV病毒學和分子生物學
        1.3 HPV分型
        1.4 HPV流行病學研究
        1.5 HPV生活史 & 感染機制研究
        1.6 HPV預防性疫苗研究進展
        1.7 HPV結構研究進展
        1.8 HPV中和表位研究進展
第二章 材料與方法
    1 儀器
    2 實驗材料
        2.1 菌株、質粒和基因
        2.2 酶、單抗和實驗動物
        2.3 工作站和軟件
        2.4 其他試劑
        2.5 常見溶液及試劑盒
    3 方法
        3.1 分子克隆相關生物學實驗方法
        3.2 蛋白質的誘導表達和純化方法
        3.3 透射電子顯微鏡觀察樣品
        3.4 低溫電鏡重構VLP的三維結構
        3.5 差示量熱掃描實驗
        3.6 分析超離法測定樣品沉降系數
        3.7 酶聯(lián)免疫吸附分析檢測HPV L1蛋白的抗原性-間接法
        3.8 動物免疫及單克隆抗體相關方法
        3.9 假病毒系統(tǒng)—中和抗體檢測實驗
第三章 結果與分析
    第一部分: HPV16/35/31結構及親緣關系分析對比
        第一部分 小結
    第二部分: HPV16/35兩型型交叉疫苗研究
        1 表達載體的構建
        2 突變VLP顆粒制備
            2.1 小量蛋白表達鑒定
            2.2 中量蛋白表達
            2.3 HPV突變L1蛋白的層析純化
            2.4 突變蛋白組裝
            2.5 分子篩層析分析
        3 突變蛋白VLP顆粒性鑒定
            3.1 HPSEC分析
            3.2 透射電鏡負染觀察顆粒構
            3.3 AUC分析顆粒均一穩(wěn)定性
        4 DSC分析突變蛋白熱穩(wěn)定性
        5 突變VLP抗原性分析
        6 H16/35突變VLP的免疫評價
            6.1 初步免疫評價
            6.2 劑量依賴免疫評價
            6.3 ED50（半數有效劑量）評價
        第二部分 小結
    第三部分: HPV16/35/31三型型交叉疫苗研究
        1 表達載體的構建
        2 突變VLP顆粒制備
            2.1 小量蛋白表達鑒定
            2.2 中量蛋白表達
            2.3 HPV突變L1蛋白的層析純化
            2.4 突變蛋白組裝
            2.5 分子篩層析分析
        3 突變蛋白VLP顆粒性鑒定
            3.1 HPSEC分析
            3.2 透射電鏡負染觀察顆粒構
            3.3 AUC分析顆粒均一穩(wěn)定性
        4 DSC分析突變蛋白熱穩(wěn)定性
        5 H16/35/31突變VLP的免疫評價
            5.1 初步免疫評價
            5.2 劑量依賴免疫評價
            5.3 ED50（半數有效劑量）評價
        第三部分 小結
    第四部分 討論
        1 型交叉疫苗在HPV疫苗中的應用前景
        2 型交叉疫苗免疫評價
        3 HPV交叉免疫機制
        4 HPV結構研究
    第五部分 小結與展望
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]冷凍電鏡技術的突破導致結構生物學發(fā)生革命性變化[J]. 尹長城.  中國生物化學與分子生物學報. 2018(01)
[2]HPV治療性疫苗研究現(xiàn)狀[J]. 王卡娜,郄明蓉.  實用婦產科雜志. 2017(02)
[3]已上市人乳頭瘤病毒疫苗的概況及其在國內的臨床研究進展[J]. 舒雅俊,湯妍,蘇家立,張吉凱.  中國生物制品學雜志. 2016(10)
[4]宮頸癌的研究新進展[J]. 蔣雪梅,李華,頓耀艷.  現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生. 2015(21)
[5]人乳頭瘤病毒疫苗預防宮頸癌的應用[J]. 夏巧凡,何蓮芝.  國際婦產科學雜志. 2015(04)
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[7]抗原表位研究方法進展[J]. 宋帥,李春玲,賈愛卿,楊冬霞,李淼.  動物醫(yī)學進展. 2010(12)
[8]HPV感染相關因素與預防[J]. 楊桂芳.  臨床醫(yī)學工程. 2010(02)
[9]HPV疫苗的現(xiàn)狀及問題[J]. 雷曼殊,張蔚,陳嬌.  醫(yī)學研究雜志. 2010(01)
[10]抗原表位預測方法的研究進展[J]. 王艷華,張德林,殷宏,付寶權.  中國獸醫(yī)科學. 2009(10)

博士論文
[1]兩類重要蛋白的分子動力學模擬及蛋白質對接方法的研究[D]. 孟烜宇.吉林大學 2011

碩士論文
[1]消減免疫法篩選HPV型間雜合顆粒特異單克隆抗體及其表位研究[D]. 陸劍.廈門大學 2014



本文編號：3036426