目的研究鈣離子/鈣調(diào)蛋白依賴(lài)性蛋白激酶Ⅱδ（Ca2+/Calmodulin dependent kinaseⅡδ,Ca MKⅡδ）RNA干擾對(duì)下游基因表達(dá)及破骨細(xì)胞分化的影響,以證實(shí)其在破骨細(xì)胞分化中的作用。方法應(yīng)用慢病毒構(gòu)建Ca MKⅡδRNA干擾載體,并確定最佳感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection,MOI）值及轉(zhuǎn)染效率。小鼠RAW264.7細(xì)胞分為對(duì)照組、空白載體組和干擾組。轉(zhuǎn)染5 d后收獲細(xì)胞,確定干擾效率;并檢測(cè)RNA干擾對(duì)活化T細(xì)胞核因子蛋白c1（NFATc1）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）、非受體酪氨酸激酶（c-Src）基因表達(dá)及破骨細(xì)胞分化的影響。結(jié)果成功構(gòu)建了Ca MKⅡδRNA干擾載體,最佳轉(zhuǎn)染MOI值為30,轉(zhuǎn)染效率可達(dá)78%（P<0.05）。重組病毒對(duì)Ca MKⅡδ的干擾效率在mRNA水平超過(guò)78%,在蛋白水平超過(guò)70%（P<0.01）。Ca MKⅡδRNA干擾顯著降低NFATc1、TRAP和c-Src基因,與對(duì)照組、空白載體組比較,其mRNA水平下降分別超過(guò)了47.8%、43.3%和48.5%（P<0.05,P<... 

【文章來(lái)源】：第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2017,39(01)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 Ca MKⅡδ干擾載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染效率測(cè)定
    1.3 實(shí)驗(yàn)分組
    1.4 干擾效率測(cè)定
        1.4.1 Real-time PCR檢測(cè)
        1.4.2 Western blot檢測(cè)
    1.5 Ca MKⅡδRNA干擾對(duì)NFATc1、TRAP、c-Src基因表達(dá)的影響
        1.5.1 免疫熒光化學(xué)檢測(cè)
        1.5.2 Real-time PCR檢測(cè)
        1.5.3 Western blot檢測(cè)
    1.6 破骨細(xì)胞生成及功能檢測(cè)
        1.6.1 TRAP染色
        1.6.2 骨吸收陷窩檢測(cè)
    1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 轉(zhuǎn)染最佳MOI值及轉(zhuǎn)染效率
    2.2 干擾效率測(cè)定
    2.2 Ca MKⅡδRNA干擾對(duì)下游因子NFATc1、TRAP、c-Src基因表達(dá)的影響
        2.2.1 經(jīng)免疫熒光細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)
        2.2.2 Real-time PCR檢測(cè)
        2.2.3 Western blot檢測(cè)
    2.3 Ca MKⅡδRNA干擾對(duì)破骨細(xì)胞分化和骨吸收的影響
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]唑來(lái)膦酸對(duì)破骨細(xì)胞分化中鈣調(diào)蛋白和鈣調(diào)蛋白依賴(lài)性激酶Ⅱ基因表達(dá)的影響[J]. 李鵬,林玨杉,張鵬,董偉,李金源,戚孟春.  中華口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2013 (11)



本文編號(hào)：3032134