骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）具有多向的分化潛能,可分化為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞以及脂肪細(xì)胞等。研究表明,力學(xué)刺激、生長(zhǎng)因子以及細(xì)胞生長(zhǎng)的基底硬度都可在一定程度上調(diào)控BMSCs的分化。生理?xiàng)l件下,BMSCs在受到力學(xué)刺激的同時(shí)還受到生長(zhǎng)環(huán)境的基底硬度以及多種生長(zhǎng)因子的調(diào)控。因此,本研究采用力學(xué)加載聯(lián)合生長(zhǎng)因子/基底硬度同時(shí)作用于BMSCs,通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞的成骨向分化標(biāo)志物堿性磷酸酶（ALP）和軟骨向分化標(biāo)志物糖胺聚糖（GAG）的表達(dá)量,來(lái)考察力學(xué)刺激、生長(zhǎng)因子以及細(xì)胞生長(zhǎng)的基底硬度三種條件對(duì)BMSCs定向分化的影響。主要研究方法、內(nèi)容和結(jié)果如下:（1）探討流體剪應(yīng)力聯(lián)合基底硬度對(duì)BMSCs分化的影響:實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞為第二、三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)組分為“24 h”組和“48 h”組,“24（48）h組”表示接種于硬度為34 KPa和80 KPa（分別模擬軟骨和骨的硬度）的水凝膠上培養(yǎng)24（48）h后采用兩種不同線性增加速度的流體剪應(yīng)力（△SS）作用20 min的BMSCs。兩種△SS分別表示從靜置后的0 min開始,在0 m... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

BMSCs誘導(dǎo)后經(jīng)兩種不同線性增加的流體剪應(yīng)力加載方式示意圖

圖 2.2 平板流動(dòng)腔系統(tǒng)示意圖Fig. 2.2 Schematic of a parallel-plate flow chamber system：流動(dòng)小室（L=7.5cm，W=2.5cm，H=0.2mm）；B：硅膠墊片（h=1.2mm）；C1，C2，機(jī)玻璃；D：灌流液入口；E：灌流液緩沖分散區(qū)；F：灌流液下行分散區(qū)；G：灌流液出1.儲(chǔ)液瓶；2.蠕動(dòng)泵；3.平板流動(dòng)腔。2.3.7 堿性磷酸酶（ALP）活性的測(cè)定定原理：堿性磷酸酶能使磷酸苯二鈉分解，產(chǎn)生游離酚和磷酸，酚在堿性溶液中與基安替吡啉反應(yīng)經(jīng)鐵氰化鉀氧化生成紅色醌衍生物，可以根據(jù)紅色物質(zhì)的行酶活力高低的測(cè)定。再根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞中堿性磷酸酶活力計(jì)算公式得出樣 ALP 活性。品的采集與處理：取出靜置培養(yǎng) 48 h 培養(yǎng)的細(xì)胞，用 4 ℃預(yù)冷的 PBS 輕柔的對(duì)載玻片清洗兩后將載玻片置于冰上，取 300 μL 細(xì)胞裂解液（1% 曲拉通 X-100）加入到

與蛋白濃度呈正比，據(jù)此我們可以測(cè)定溶液或者線繪制：A 試劑盒里面的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品用 PBS 稀釋至濃度為 0.4、0.5 mg/mL 各濃度的蛋白檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品，并使照；品數(shù)量，按 BCA 試劑 A：BCA 試劑 B=50:1 的比例分混勻，混勻的 BCA 工作液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定；μL 的配置好的不同濃度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品加入到 96 孔的 BCA 工作液混勻，在于 37 ℃放置 20-30 min 后白標(biāo)準(zhǔn)品的 570 nm 處吸光值；的數(shù)據(jù)使用 GraphPad Prism 6 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，并繪計(jì)算出回歸線方程為 Y=0.6019*X+0.00126 (R2=0 為樣品的濃度值（μg/mL）；


本文編號(hào)：3023500