目的:探索一種基于CLARITY技術(shù)的快速肝組織透明化手段,通過(guò)條件優(yōu)化對(duì)肝硬化動(dòng)物模型進(jìn)行免疫熒光標(biāo)記三維成像,并基于該技術(shù)開(kāi)發(fā)一種石蠟切片的抗體洗脫術(shù)。方法:（1）水凝膠灌注大鼠,取出肝臟待水凝膠凝固后切為1mm薄片。切片隨機(jī)分為兩組,對(duì)照組采用常規(guī)被動(dòng)脂質(zhì)清除法處理,實(shí)驗(yàn)組置于特制電泳裝置中,在外加電場(chǎng)條件下洗滌脂質(zhì),通過(guò)提高電泳溫度并量化組織透明度,探索最優(yōu)肝透明化條件。（2）使用肝透明優(yōu)化條件對(duì)DEN誘導(dǎo)的大鼠肝硬化模型進(jìn)行脂質(zhì)清除,利用多種大鼠器官組織探索免疫熒光標(biāo)記成像條件,對(duì)大鼠肝硬化模型組織實(shí)施激光共聚焦顯微鏡掃描三維成像。（3）將CLARITY技術(shù)的水凝膠固定、脂質(zhì)清除和抗體洗脫特性應(yīng)用于石蠟切片,探索石蠟切片的透明化方法的最佳條件,進(jìn)行抗體洗脫,并與常規(guī)酸洗脫進(jìn)行對(duì)比。通過(guò)對(duì)比免疫熒光標(biāo)記切片洗脫前后熒光信號(hào)變化及積分熒光強(qiáng)度測(cè)定來(lái)確定抗體洗脫效果。結(jié)果:（1）實(shí)驗(yàn)組在12V電壓下37℃電泳48h時(shí)肝切片相對(duì)透明度達(dá)到最高并保持至96h,隨后相對(duì)透明度開(kāi)始下降,而在48h電泳清除脂質(zhì)后提高溫度繼續(xù)電泳48h,肝組織切片相對(duì)透明度可進(jìn)一步提高且對(duì)照組脂質(zhì)清除速度明顯... 

【文章來(lái)源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠器官被動(dòng)脂質(zhì)清除后光學(xué)透明度變化

ETC設(shè)備原理圖

肝切片常規(guī)ETC與被動(dòng)清除48h灰度值對(duì)比

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CLARITY技術(shù)及其在生物學(xué)研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 鄔國(guó)斌,何劍波,連芳.  中國(guó)癌癥防治雜志. 2015(02)
[2]免疫酶雙重染色中抗體洗脫的進(jìn)一步研究[J]. 宋天保,王麗蓉.  中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志. 1992(02)



本文編號(hào)：3018700