目的:通過構(gòu)造骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell,BMSCs）體外衰老模型,研究抗壞血酸在延緩BMSCs衰老中的具體作用以及潛在的分子機(jī)制。方法:1.選取7日齡SD大鼠,在無菌條件下完全分離出脛骨和腓骨,并抽取其中的骨髓,再利用全骨髓貼壁培養(yǎng)法在體外分離培養(yǎng)出BMSCs。2.利用D-半乳糖與BMSCs共培養(yǎng),誘導(dǎo)BMSCs衰老,試圖建立BMSCs體外衰老模型。3.將抗壞血酸與衰老的BMSCs共培養(yǎng),利用SA-β-Gal試劑盒染色檢測分析抗壞血酸作用于衰老BMSCs后SA-β-Gal染色陽性率的變化,利用免疫熒光顯微鏡檢測抗壞血酸作用于衰老BMSCs后細(xì)胞內(nèi)活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）含量的變化,利用Western blot法分析衰老相關(guān)蛋白p16INK4a的變化并研究BMSCs衰老中相關(guān)信號通路蛋白的變化。4.聯(lián)用AKT抑制劑與抗壞血酸進(jìn)一步驗(yàn)證AKT/mTOR信號通路在抗壞血酸抑制細(xì)胞衰老中的作用。結(jié)果:D-半乳糖能誘導(dǎo)BMSCs衰老,衰老的BMSCs中ROS含量增多。抗壞血酸減少了衰老MSCs中的... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２：?Ｐ０代細(xì)胞原始集落形成，可見梭形、多邊形ＢＭＳＣ貼壁，血細(xì)胞成圓點(diǎn)狀，??

流式細(xì)胞儀檢測的數(shù)據(jù)顯示了我們提取的大鼠ＢＭＳＣｓ表面標(biāo)記物的表達(dá)情??況，培養(yǎng)的Ｐ３代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面分子蛋白標(biāo)記ＣＤ２９、ＣＤ９０呈高表達(dá)，而??ＣＤ３１、ＣＤ４５陰性（圖１），證明所提取細(xì)胞為ＢＭＳＣ。??｜ｎ?????—ＣＤ９０?—?ＣＤ２９?—?ＣＤ３１?—?ＣＤ４５????ｃｏｎｔｒｏｌ?＾?—?ｃｏｎｔｒｏｌ?宕?＿?ｃｏｎｔｒｏｌ?＾?＿?ｃｏｎｔｒｏｌ?，??ｙｉｃ?ｊ?ｌ！??ｉ〇１?ｍ２?ｉ〇３?１０４?ｉｇ５?１０６?＼ｉｊ７２?ｉ〇１?ｉ＃２?１０３?ｕ４?，０７２?，〇１?時(shí)２?的?３?川５?１０６?ｗ７，２?ｉ〇１?ｉａ２?ｔ０３?１９４?｜９Ｓ?｜〇６?ｉ〇７Ｊ??ＦＬ２－Ａ?ＦＬ１－Ａ?ＦＬ２－Ａ?ＦＬ４－Ａ??圖１：流式細(xì)胞儀：檢測細(xì)胞表而分子蛋ｆｔ?ＳＣＤ２９和ＣＤ９０麗表達(dá)，??Ｗ?ＣＤ３１和ＣＤ４５表達(dá)為■性：，??５．２普通光學(xué)顯微鏡下觀察各代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)變化??分別取Ｐ０、Ｐ３、Ｐ５代在培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞，在光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)改變。??發(fā)現(xiàn)Ｋ）代細(xì)胞原始集落形成，可見梭形、多邊形ＢＭＳＣ岵蜜，血細(xì)胞成圓點(diǎn)狀，未??貼壁，Ｐ３代細(xì)胞初步純化，細(xì)胞呈旋渦狀生長，外形似長梭形和多邊形《?Ｐ５代細(xì)胞??基本完全純化。所以我們選取Ｐ３－Ｐ５代骨髓間充質(zhì)寧細(xì)胞開展我們下面的實(shí)驗(yàn)。??■?■?Ｉ??ｐ〇?Ｐ３?Ｐ５??圖２：?Ｐ０代細(xì)胞原始集落形成

?儒交通大學(xué)＿雜賊５．３確定Ｄ－半乳糖作用濃度??分另＿甩ｌｇ／１，ｌ〇ｇ／ｌ，ｌ〇〇ｇ／ｌ的Ｄ－半乳糖與骨髓間２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ，再利用ＣＣＫ－８細(xì)胞增殖活性檢測試作用不同時(shí)間對間充質(zhì)干細(xì)胞衰老的影響。我們發(fā)現(xiàn)活性的影響呈時(shí)間和濃度依賴性。通過ＩＣ５０和Ｄ－半１０ｇ／ｌＤ－半乳糖作用４８ｈ用于我們接下面的實(shí)驗(yàn)。該作究者應(yīng)用Ｄ－半乳糖誘導(dǎo)細(xì)胞衰老相符？??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]D-半乳糖對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞衰老的影響[J]. 顏冰希,余姍姍,馮曉,吳冬玲,蔡昕筱,周倩沁,何曉敏,陳愛嫩,張大勇.  浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2013(06)
[2]D-半乳糖對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞擬衰老作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 邢玉芝,楊玲麟,林洪,胡火珍,王有為.  中國修復(fù)重建外科雜志. 2006(04)



本文編號：3015318