目的:研究銅綠假單胞菌噬菌體PaP1 DNA聚合酶Gp90通過脫堿基位點(diǎn)損傷的動(dòng)力學(xué)分子機(jī)制,有助于我們理解這種損傷對(duì)DNA復(fù)制造成DNA紊亂和突變的機(jī)制,從而為人類相關(guān)疾病的治療奠定基礎(chǔ);為揭示DNA跨損傷合成、DNA修復(fù)之間的關(guān)系以及環(huán)境毒物致DNA脫堿基損傷的作用機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。方法:構(gòu)建、表達(dá)和純化Gp90 exo^-,通過全長(zhǎng)延伸、單個(gè)堿基插入和下一位堿基延伸的動(dòng)力學(xué)方法研究脫堿基位點(diǎn)對(duì)DNA復(fù)制效率和保真度的影響;采用前穩(wěn)態(tài)前動(dòng)力學(xué)方法研究DNA復(fù)制時(shí)單個(gè)堿基點(diǎn)插入的速度;通過表面等離子共振技術(shù)研究蛋白質(zhì)與DNA間相互作用,探究脫堿基損傷對(duì)DNA聚合酶與DNA相互作用的影響。結(jié)果:（1）正常模板時(shí),野生型Gp90能產(chǎn)生全長(zhǎng)延伸產(chǎn)物和外切產(chǎn)物。當(dāng)模板是脫堿基損傷的模板時(shí),野生型Gp90只能產(chǎn)生降解產(chǎn)物,而沒有延伸產(chǎn)物。Gp90 exo^-進(jìn)行DNA復(fù)制時(shí),與正常模板相比,DNA聚合酶通過脫堿基位點(diǎn)時(shí)幾乎沒有全長(zhǎng)延伸產(chǎn)物,兩個(gè)脫堿基的模板只出現(xiàn)了一位28mer的延伸產(chǎn)物。（2）Gp90 exo^-進(jìn)行單個(gè)堿基插入的穩(wěn)... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Pet28b-Gp90exo-小量誘導(dǎo)SDS-PAGE電泳分析結(jié)果

et 28b-Gp90 exo 大量誘導(dǎo) SDS-PAGE 電 Gp90exo-were overexpressed and analyzeo 蛋白純化結(jié)果蛋白純化結(jié)果，M1 代表蛋白 Marke，F(xiàn)low）；4-14：梯度洗脫目的蛋白樣xo 的 N 端有 6 組氨酸標(biāo)簽，促進(jìn)了好被吸附，洗脫出來的蛋白條帶在預(yù)管進(jìn)行濃縮，后在蛋白存儲(chǔ)液中進(jìn)行用 NanoPhotometer 測(cè) 260 nm 處的吸白濃度為第一管：230 uM、第二管：4管：250 uM、第六管：400 uM。于-

24圖 4 Pet 28b-Gp90 exo 蛋白純化結(jié)果（SDS-PAGE 電泳檢測(cè)）igure 4 Pet 28b-Gp90exo- was purified and analyzed on a 10 % SDS-P


本文編號(hào)：3003007