[目的]：考察急性應(yīng)激誘導大鼠海馬Akt/FKHRL1信號通路活性的改變及其時效性；探討心理應(yīng)激的大鼠模型。[材料和方法]：1.實驗動物：雄性SD大鼠,體重280±20g,每籠5只于動物房常規(guī)飼養(yǎng)。2.實驗試劑：①一次抗體[P-Akt（Ser-473）、Akt（Ser-473）、P-FKHRL1 （Thr-32）、FKHRL1（Thr-32）],羊抗兔多克隆二次抗體；②增強型化學發(fā)光系統(tǒng)（enhanced chemiluminescent system, ECL）試劑盒；③大鼠ACTH放免試劑盒。3.實驗方法：所有動物在飼養(yǎng)七天后隨機分配為正常對照組（C）、軀體應(yīng)激組（S）和心理應(yīng)激組（PS）。對S組建立急性足底應(yīng)激模型,對PS組通過讓其看和聽到同伴的應(yīng)激制造心理應(yīng)激模型,觀察急性應(yīng)激后大鼠海馬Akt/FKHRL1信號通路的活性改變情況和其變化的時效性及應(yīng)激后血漿促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）的動態(tài)變化,并與對照組相比較。Akt/FKHRL1信號通路的活性用蛋白質(zhì)印跡（Western blotting）方法測定其磷酸化水平。用放射免疫方法測定血漿ACTH濃度。用SPSS16.0統(tǒng)計軟件對... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

H隊軸

Ak燈PKB為Foxo的上游基因，研究發(fā)現(xiàn)Ak燈PKB的磷酸化在Foxo家族轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控中的重要作用。Ak燈PKB活化后可以移位到核內(nèi)，磷酸化FoxO家族轉(zhuǎn)錄因子，F(xiàn)oxo磷酸化后出核，轉(zhuǎn)錄活性降低(見圖4)。其中，F(xiàn)KHRLI蛋白的分子量約為97KD，在腦的各個部位都有表達，其活性受Ser253、Ser3巧以及Thr犯磷酸化的調(diào)節(jié)[30】。研究認為Foxo家族的靶基因產(chǎn)物可能是胞外配體，如FaS配體、Trail和TNFRI結(jié)合死亡域蛋白 (TRADD);促凋亡因子如Bim和Bcl一6等。活化的Akt與FoxO結(jié)合降低了其轉(zhuǎn)錄水平從而減少細胞的凋亡[3’一32]。!11…!.!!:!…111.一!燮烈《，》入川卜曲洶洲側(cè)知黔.挑容圖4:Akt/FKHRLI信號通路(徹 ivooldbartetal，2003)臨床死后腦研究發(fā)現(xiàn)抑郁癥患者腦中FKHRLI的上流分子Akt的活性偏低[33];我們新近的研究也發(fā)現(xiàn)慢性束縛應(yīng)激能誘導大鼠海馬Ak燈FKHRLI信號通路活性的改變[34]，但具體的機理以及應(yīng)激時海馬Ak燈FKHRLI信號通路活性改變的生物學意義尚不明確。因此，明確Ak燈FKHRLI信號通路在個體應(yīng)激反應(yīng)中的作用是一個圣待研究的課題。

急性心理應(yīng)激ACTH測定值單因素方差分析結(jié)果etweenGrouPsithinGrouPsOla!SUmof旦創(chuàng)匹絲旦呈3624.81413434.27317059.087業(yè)旦衛(wèi)衛(wèi)型旦魚724.963584.099F1.2412328性心理應(yīng)激P一Akt與Akt的活性改變理應(yīng)激的大鼠應(yīng)激前后及應(yīng)激后不同時間點P一Akt/Akt比值無統(tǒng)急性心理應(yīng)激P一從t與Akt的表達對照)、0(應(yīng)激后即刻)、smin(應(yīng)激后smin)、15min(應(yīng)激后15min、60min(應(yīng)激后60min)

【參考文獻】：
期刊論文
[1]慢性束縛應(yīng)激對大鼠腦內(nèi)Fas、FasL含量的影響[J]. 朱婉兒,張蓉,胡長春,董逢泉,吳麗霞,陳芝蕓.  心理學報. 2008(06)
[2]慢性應(yīng)激對大鼠海馬Akt/FKHRL1信號通路活性的影響[J]. 朱婉兒,胡長春,謝文婷,吳麗霞,陳芝蕓,梅垣宏行.  心理學報. 2007(04)



本文編號：2993847