骨骼肌是人體最豐富的組織,對于生命活動(dòng),尤其是運(yùn)動(dòng)的維持至關(guān)重要。但成年人體內(nèi)可再生的骨骼肌干細(xì)胞數(shù)量極其有限,在肌肉發(fā)生比較大的損傷或疾病時(shí),不足以補(bǔ)充受損的肌肉細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞一直是組織和器官再生領(lǐng)域的研究熱點(diǎn),在體外可分化為骨骼肌用于再生醫(yī)學(xué),但其分化的調(diào)控機(jī)制尚不明確。因此,研究胚胎干細(xì)胞骨骼肌分化的作用和機(jī)制,可為骨骼肌疾病的細(xì)胞替代療法和藥物篩選提供途徑。研究發(fā)現(xiàn)Rbm24在骨骼肌中高表達(dá),在小鼠胚胎干細(xì)胞分化過程中,Rbm24升高伴隨著骨骼肌標(biāo)記基因的上調(diào)。我們利用Cre-Loxp可誘導(dǎo)調(diào)控系統(tǒng),在小鼠胚胎干細(xì)胞骨骼肌分化過程中誘導(dǎo)Rbm24過表達(dá),探索Rbm24在骨骼肌分化過程中的作用。我們利用懸滴法形成擬胚體誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞體外分化,通過實(shí)時(shí)熒光定量RCR檢測Rbm24與骨骼肌特異性標(biāo)志物的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,在分化過程中誘導(dǎo)Rbm24過表達(dá),與對照組相比,Pax3、Pax7和MyoG的mRNA表達(dá)量明顯增加。免疫熒光染色結(jié)果顯示,過表達(dá)Rbm24后,MyoG和MyHC的蛋白表達(dá)也顯著上升。并且在分化第25天,觀察到Rbm24過表達(dá)組出現(xiàn)骨骼肌樣細(xì)胞持續(xù)性抽動(dòng)。表明Rb... 

【文章來源】：廈門大學(xué)福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２體節(jié)形成早期（ｉ）和體節(jié)形成末期（ｉｉ）胚胎橫截面示意圖??Ｆｉｇ．２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｔｒａｎｓｖｅｒｓｅ?ｓｅｃｔｉｏｎｓ?ｔｌｉｒｏｕｇｈ?ｔｈｅ?ｅｍｂｒｙｏ?ａｔ?ｅａｒｌｙ?（ｉ）?ａｎｄ?ｌａｔｅ?（ｉｉ）??

使用單層分化方法，通過調(diào)節(jié)信號通路途徑誘導(dǎo)軸旁中胚層的分化。??Ｃｈａｌ等人通過在分化的不同時(shí)間點(diǎn)添加不同信號通路激活劑或抑制劑誘導(dǎo)??胚胎干細(xì)胞向骨骼肌細(xì)胞分化。如圖３，加入Ｗｎｔ途徑激活劑Ｒｓｐｏ３或ＧＳＫ３ｐ??抑制劑?ＣＨＩＲＯＮ９９０２１?促進(jìn)?ｍＥＳＣｓ?向?ＰＳＭ（ｐｒｏｓｏｍｉｔｉｃ?ｍｅｓｏｄｅｒｍ）分化，之后加??入生長因子ｂＦＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦ促進(jìn)ＰＳＭ向Ｐａｘ７＋祖細(xì)胞、肌細(xì)胞和肌管分化ｗ。??Ｒｓｐｏ３／ＣＨＩＲ?Ｒｓｐ〇３／ＣＨＩＲ?ｂＦＧＦ，?ＨＧＦ?ｂＦＧＦ，?ＨＧＦ??Ｉｎ?ｖｉｔｒｏ?廣一ＬＤＮ?，?＾?ＬＤＮ?廣—－Ｖ．?ＩＧＦ?ＩＧＦ??ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ??？?ＣｔＪ??？??Ｍｏｕｓｅ?Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ?Ｍｓｇｎｌ＊?Ｐａｘ３＊?ａＰＳＭ?Ｐａｘ７＊?ＭｙｏＧ１?Ｍｙｏｃｙｔｅ??Ｓｔｅｍ?Ｃｅｌｌ?ｐＰＳＭ?Ｃｅｌｌ?Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ?Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ?ＭｙＨＣ?Ｍｙｏｔｕｂｅ??Ｄａｙ?０?Ｄａｙ?４?Ｄａｙ?６?Ｄａｙ?９?Ｄａｙ?２５??圖３體外使用生長因子和小分子促進(jìn)ｍＥＳＣｓ骨骼肌分化的示意圖??Ｆｉｇ．３?Ｔｈｅ?ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ?ｃｅｌｌｓ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｍＥＳＣｓ?ｕｓｉｎｇ??ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｌｙ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒｓ?ａｎｄ?ｓｍａｌｌ?ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ?ａｒｅ?ｓｈｏｗｎ．??ｍＥＳＣｓ在不同條件下可分化為三胚層所有不同的細(xì)胞類型，包括骨骼肌。??然而

?第一章前言???ＲＢＮＳ（ＲＮＡ?Ｂｉｎｄ－ｎ－Ｓｅｑ）等，以?ＲＮＡ?為核心的研究技術(shù)包括?ＣｈＩＲＰ（Ｃｈｒｏｍａｔｉｎ??ｉｓｏｌａｔｉｏｎ?ｂｙ?ＲＮＡ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）和?ＣＨＡＲＴ（Ｃａｐｔｕｒｅ?ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＲＮＡ??ｔａｒｇｅｔｓ）等?〇??１．３．２?ＲＮＡ結(jié)合蛋白功能的多樣性??ＲＢＰｓ在ＲＮＡ生物過程的每一個(gè)方面都發(fā)揮功能，從ＲＮＡ的轉(zhuǎn)錄，??ｐｒｅ－ｍＲＮＡ的剪切，多腺苷酸化，到ＲＮＡ的修飾，轉(zhuǎn)運(yùn)，定位，轉(zhuǎn)錄和翻轉(zhuǎn)。??ＲＢＰ不僅影響ＲＮＡ的每一個(gè)生物過程，而且為這些過程間提供了一個(gè)很好連??接的作用０＿＇２７］，這些錯(cuò)綜復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)的正常運(yùn)行對于轉(zhuǎn)錄后事件的協(xié)調(diào)是必不可??少的。??


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