研究目的：以腮腺炎減毒活疫苗病毒作為溶瘤病毒,研究其對腫瘤的抑制效果,分析其抗腫瘤的作用機制,為腫瘤治療探索新思路。研究方法：本文采用腮腺炎減毒活疫苗病毒（杭州市疾病控制中心）、小鼠胃癌細胞系（MFC）和人腎母細胞瘤細胞系（G401）開展研究。實驗主要分為3組,分別是腮腺炎減毒活疫苗病毒原液組、腮腺炎病毒原液*10-1組（即病毒滴度為原液組的1/10）和無病毒的對照組。1.采用Vero細胞體外擴增病毒,收集腮腺炎減毒活疫苗病毒；利用空斑形成單位PFU法,測定病毒滴度。2.96孔細胞培養(yǎng)板內接種細胞,采用CCK-8檢測腮腺炎減毒活疫苗病毒原液組對MFC、G401腫瘤細胞的抑制作用。3.通過FITC Annexin V/PI-流式細胞方法,在腮腺炎減毒活疫苗病毒誘導下,連續(xù)3天觀察MFC、G401腫瘤細胞的凋亡率變化。4.獲取腮腺炎減毒活疫苗病毒感染3天后的MFC、G401腫瘤細胞,提取DNA全基因,進行DNA電泳,明確DNA Ladder凋亡小體的形成。5.提取腮腺炎病毒感染3天后的MFC、G401腫瘤細胞蛋白,進行Western Blot蛋白電泳,檢測自噬相關蛋白P62、LC3（LC3... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
英文縮寫詞與中英文索引
目錄
引言
器材與試劑
    1、材料和試劑
    2、儀器設備
    3、試劑配制
實驗方法
    1、細胞培養(yǎng)、傳代、凍存和復蘇
    2、腮腺炎減毒活疫苗病毒擴增、純化及滴度檢測
    3、CCK-8檢測腮腺炎減毒活疫苗病毒對G401、MFC腫瘤細胞的抑制作用
    4、FITC ANNEXIN V/PI檢測細胞凋亡率
    5、DNA提取,進行電泳DNA LADDER
    6、WESTERN BLOT蛋白電泳
    7、建立腫瘤動物模型與溶瘤治療
    8、統(tǒng)計學方法
實驗結果
    1、腮腺炎減毒活疫苗病毒PFU滴度檢測
    2、腮腺炎減毒活疫苗病毒對腫瘤細胞的抑制作用
    3、腫瘤細胞感染腮腺炎減毒活疫苗病毒后的細胞學變化
    4、腮腺炎減毒活疫苗病毒誘導腫瘤細胞凋亡
    5、腮腺炎減毒活疫苗病毒誘導產生DNA LADDER
    6、腮腺炎減毒活疫苗病毒誘導腎母細胞瘤細胞自噬
    7、腮腺炎減毒活疫苗病毒對荷瘤鼠胃癌的治療作用
討論
結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
作者簡介



本文編號：2980077