第一部分：損傷胰腺組織提取液對大鼠BMSCs轉(zhuǎn)分化為胰島素分泌細胞的影響目的：在大鼠損傷胰腺組織提取液促進BMSCs轉(zhuǎn)分化為胰島素分泌細胞過程中,動態(tài)檢測轉(zhuǎn)分化的胰島素分泌細胞胰腺發(fā)育相關(guān)基因、蛋白、以及細胞形態(tài)的變化,探討損傷胰腺組織提取液對BMSCs轉(zhuǎn)分化為胰島素分泌細胞的效果和機制。方法：將SD大鼠胰腺切除90%,兩天后處死大鼠取剩余胰腺組織勻漿,提取組織液。在大鼠BMSCs培養(yǎng)過程中加入損傷胰腺組織提取液,培養(yǎng)14天,動態(tài)檢測大鼠BMSCs是否有胰腺發(fā)育相關(guān)基因和蛋白的表達,以及細胞形態(tài)學(xué)改變,對轉(zhuǎn)分化的胰島素分泌細胞檢測胰島素陽性細胞效率,葡萄糖刺激實驗評價轉(zhuǎn)分化的胰島素分泌細胞分泌胰島素的水平。結(jié)果：損傷胰腺組織提取液可以誘導(dǎo)大鼠BMSCs轉(zhuǎn)分化為胰島素分泌細胞,在轉(zhuǎn)分化過程中依次表達與胰腺發(fā)育密切相關(guān)的基因,如PDX-1,NKX6.1,GLUT2,PC2,C肽等；也表達成熟胰腺表達的蛋白,如：C肽,Insulin,Nkx6.1等；分泌胰島素的細胞占13.3±1.8%,胰島素分泌水平為天然胰島的1/20-1/50。結(jié)論：胰腺損傷后,損傷胰腺組織分泌富含胰腺修復(fù)和發(fā)育分化的相... 

【文章來源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

DTZ染色鑒定胰島素分泌細胞

圖4.各基因熔解曲線圖a.p一aetin:b.PDX一l:e.GlutZ:d.Ngn3:e.1511:f.NkX6.l:9.PCI:11.PCZ:1.Sst3.5Real一time檢測胰腺發(fā)育相關(guān)基因的動態(tài)表達變化實時熒光定量PCR的結(jié)果顯示，PDXI基因在誘導(dǎo)第7天開始表達上調(diào)，第10天下降，第14天表達顯著上調(diào)，mRNA水平約為O天的7.78倍;Ngn3從誘導(dǎo)開始表達顯著上調(diào)，到誘導(dǎo)第10天達到最高，接著表達開始顯著下降，到14天時mRNA水平為O天的7.78倍;作為pdx一l，Ngn3的下游基因的151一1，Nkx6.1，GlutZ，與p細胞發(fā)育相關(guān)，其表達從開始誘導(dǎo)起開始表達上調(diào)，到14天時，mRNA水平分別為O天表達量的3.12倍，6.36倍，2.“倍;PC從誘導(dǎo)開始表達逐漸上調(diào)，到第10天達到高峰后表達開始下降，在第14天時幾乎不再表達。PCZ從誘導(dǎo)開始逐漸表達，到第7天時達最高峰，接著逐漸下降，第14天時mRNA水平為天的2倍左右;SSt從誘導(dǎo)開始表達逐漸上調(diào)，到第7天表達達到高峰，接著表達逐漸下調(diào)，到第14天時mRNA水平表達為0天的8倍左右。(見圖5)

h圖5.BMSCS分化過程中胰腺發(fā)育相關(guān)基因動態(tài)表達F195.Real一timePCRanalysisofmRNAexpressionrelatedtoPanereatiedifferentiationinBMSCs.3.6免疫熒光染色結(jié)果分析為了確認受損胰腺蛋白復(fù)合物能夠誘導(dǎo)BMSCS分化產(chǎn)生胰島素分泌細胞，我們利用免疫熒光技術(shù)檢測了分化14天后的細胞，結(jié)果顯示經(jīng)過誘導(dǎo)體系誘導(dǎo)后的細胞分別呈現(xiàn)PDXI(紅色)，Insulin(紅色)，Somatostatin(紅色)和NKX6.l(綠色)陽性，證明分化細胞確實具有合成胰島素的功能。同時檢測到C一膚(紅色)陽性的細胞，證明細胞所表達的胰島素為細胞新鮮合成而非從其他途徑獲得。天然SD大鼠的胰島細胞作為陽性對照，藍色為DAPI染核(見圖6)，正常組與空白組細胞未能染色。l9


本文編號：2973903