第一部分：損傷胰腺組織提取液對(duì)大鼠BMSCs轉(zhuǎn)分化為胰島素分泌細(xì)胞的影響目的：在大鼠損傷胰腺組織提取液促進(jìn)BMSCs轉(zhuǎn)分化為胰島素分泌細(xì)胞過程中,動(dòng)態(tài)檢測(cè)轉(zhuǎn)分化的胰島素分泌細(xì)胞胰腺發(fā)育相關(guān)基因、蛋白、以及細(xì)胞形態(tài)的變化,探討損傷胰腺組織提取液對(duì)BMSCs轉(zhuǎn)分化為胰島素分泌細(xì)胞的效果和機(jī)制。方法：將SD大鼠胰腺切除90%,兩天后處死大鼠取剩余胰腺組織勻漿,提取組織液。在大鼠BMSCs培養(yǎng)過程中加入損傷胰腺組織提取液,培養(yǎng)14天,動(dòng)態(tài)檢測(cè)大鼠BMSCs是否有胰腺發(fā)育相關(guān)基因和蛋白的表達(dá),以及細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,對(duì)轉(zhuǎn)分化的胰島素分泌細(xì)胞檢測(cè)胰島素陽(yáng)性細(xì)胞效率,葡萄糖刺激實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)分化的胰島素分泌細(xì)胞分泌胰島素的水平。結(jié)果：損傷胰腺組織提取液可以誘導(dǎo)大鼠BMSCs轉(zhuǎn)分化為胰島素分泌細(xì)胞,在轉(zhuǎn)分化過程中依次表達(dá)與胰腺發(fā)育密切相關(guān)的基因,如PDX-1,NKX6.1,GLUT2,PC2,C肽等；也表達(dá)成熟胰腺表達(dá)的蛋白,如：C肽,Insulin,Nkx6.1等；分泌胰島素的細(xì)胞占13.3±1.8%,胰島素分泌水平為天然胰島的1/20-1/50。結(jié)論：胰腺損傷后,損傷胰腺組織分泌富含胰腺修復(fù)和發(fā)育分化的相... 

【文章來源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

DTZ染色鑒定胰島素分泌細(xì)胞

圖4.各基因熔解曲線圖a.p一aetin:b.PDX一l:e.GlutZ:d.Ngn3:e.1511:f.NkX6.l:9.PCI:11.PCZ:1.Sst3.5Real一time檢測(cè)胰腺發(fā)育相關(guān)基因的動(dòng)態(tài)表達(dá)變化實(shí)時(shí)熒光定量PCR的結(jié)果顯示，PDXI基因在誘導(dǎo)第7天開始表達(dá)上調(diào)，第10天下降，第14天表達(dá)顯著上調(diào)，mRNA水平約為O天的7.78倍;Ngn3從誘導(dǎo)開始表達(dá)顯著上調(diào)，到誘導(dǎo)第10天達(dá)到最高，接著表達(dá)開始顯著下降，到14天時(shí)mRNA水平為O天的7.78倍;作為pdx一l，Ngn3的下游基因的151一1，Nkx6.1，GlutZ，與p細(xì)胞發(fā)育相關(guān)，其表達(dá)從開始誘導(dǎo)起開始表達(dá)上調(diào)，到14天時(shí)，mRNA水平分別為O天表達(dá)量的3.12倍，6.36倍，2.“倍;PC從誘導(dǎo)開始表達(dá)逐漸上調(diào)，到第10天達(dá)到高峰后表達(dá)開始下降，在第14天時(shí)幾乎不再表達(dá)。PCZ從誘導(dǎo)開始逐漸表達(dá)，到第7天時(shí)達(dá)最高峰，接著逐漸下降，第14天時(shí)mRNA水平為天的2倍左右;SSt從誘導(dǎo)開始表達(dá)逐漸上調(diào)，到第7天表達(dá)達(dá)到高峰，接著表達(dá)逐漸下調(diào)，到第14天時(shí)mRNA水平表達(dá)為0天的8倍左右。(見圖5)

h圖5.BMSCS分化過程中胰腺發(fā)育相關(guān)基因動(dòng)態(tài)表達(dá)F195.Real一timePCRanalysisofmRNAexpressionrelatedtoPanereatiedifferentiationinBMSCs.3.6免疫熒光染色結(jié)果分析為了確認(rèn)受損胰腺蛋白復(fù)合物能夠誘導(dǎo)BMSCS分化產(chǎn)生胰島素分泌細(xì)胞，我們利用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)了分化14天后的細(xì)胞，結(jié)果顯示經(jīng)過誘導(dǎo)體系誘導(dǎo)后的細(xì)胞分別呈現(xiàn)PDXI(紅色)，Insulin(紅色)，Somatostatin(紅色)和NKX6.l(綠色)陽(yáng)性，證明分化細(xì)胞確實(shí)具有合成胰島素的功能。同時(shí)檢測(cè)到C一膚(紅色)陽(yáng)性的細(xì)胞，證明細(xì)胞所表達(dá)的胰島素為細(xì)胞新鮮合成而非從其他途徑獲得。天然SD大鼠的胰島細(xì)胞作為陽(yáng)性對(duì)照，藍(lán)色為DAPI染核(見圖6)，正常組與空白組細(xì)胞未能染色。l9


本文編號(hào)：2973903