目的:分別用GFP/RFP的整合布魯氏桿菌M5/16M（以下簡(jiǎn)稱GFP-M5和RFP-16M）侵染腹腔巨噬細(xì)胞（MΦ）,檢測(cè)白介素-2（IL-2）調(diào)節(jié)作用下,被GFP-M5和RFP-16M侵染的MΦ培養(yǎng)不同時(shí)間所釋放的腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、γ-干擾素（IFN-γ）、NO因子的含量;CFU測(cè)定MΦ內(nèi)GFP-M5和RFP-16M的活菌數(shù),并計(jì)算MΦ的吞噬指數(shù),判斷MΦ的吞噬及其殺菌能力;利用血球計(jì)數(shù)板和倒置熒光顯微鏡,計(jì)算熒光細(xì)胞數(shù),以此來(lái)計(jì)算MΦ的吞噬率;臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)不同濃度和時(shí)間點(diǎn)被侵染后MΦ的存活率;觀察在不同時(shí)間點(diǎn)和不同濃度IL-2作用下,被侵染后MΦ的增殖變化;利用RT-PCR和凝膠電泳技術(shù)驗(yàn)證MΦ不表達(dá)并分泌IL-2;以此來(lái)探討IL-2對(duì)MΦ在被GFP-M5和RFP-16M侵染后的免疫調(diào)節(jié)的作用,為臨床運(yùn)用IL-2及治療布病提供新的思路和理論依據(jù)。方法:1、將正常的布魯氏菌16M株與RFP-16M培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期后收集菌體,用麥?zhǔn)媳葷峁芘渲煤盟杈旱臐舛?依照細(xì)菌和細(xì)胞的比例為100:1進(jìn)行侵染,利用平板計(jì)數(shù)法來(lái)比較正常細(xì)菌16M與RFP-16M在胞內(nèi)的存活能力;2、... 

【文章來(lái)源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

RNA凝膠電泳注：1、1%agarose，180V，15min.

① ②圖 2-1 RNA 凝膠電泳注：1、1% agarose，180V，15min.2、①②為小鼠被菌株刺激后的 Raw264.7 的總 RNA 提取和 PCRA 為模板，得到的 PCR 產(chǎn)物，通過(guò) 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)（圖 2-2tin）組有明亮的條帶，空白對(duì)照組（Nc）和 IL-2 組無(wú)條帶，表明了 MIL-2，本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果由外源 IL-2 引起。① ② ③ ④

C ×200 Raw264.7 D ×200 GFP-M5 infected Raw264圖 2-3 倒置熒光顯微鏡下觀察紅色熒光和綠色熒光：A、B 組--A 圖為 100 倍自然光源下，B 圖為倒置熒光顯微鏡下所拍；C、D 組--C 圖為 200 倍自然光源下，D 圖為倒置熒光顯微鏡下所拍。 AB、CD 顯示，與自然光照下對(duì)比，倒置熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，紅色熒光蛋白在 M 內(nèi)可以正常表達(dá)，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)（M 的吞噬率）礎(chǔ)。IL-2 對(duì) GFP-M5 侵染 M 的調(diào)節(jié)作用1 GFP-M5 侵染 M 后細(xì)胞釋放各細(xì)胞因子的時(shí)效關(guān)系了排除培養(yǎng)液（主要是血清中）中的干擾，故設(shè)一陰性對(duì)照組，表 2-2性對(duì)照所得數(shù)據(jù)：布魯氏菌 GFP-M5 侵染 M 后，釋放了 TNF- 、I，GFP-M5 刺激后 2h，TNF- 升高，6h 達(dá)到峰值[(12.360±1.202)ng/L]，與0h 比較，呈極顯著差異性，P<0.01；GFP-M5 侵染 24h 時(shí)，IFN-γ 24±0.621)ng/L，P<0.01]；在 GFP-M5 侵染 2h 時(shí)，NO 因子含量持續(xù)升高，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：2955983