目的：1.構(gòu)建攜帶大鼠Suv39h1基因的重組腺病毒載體（Ad-Suv39h1）,觀察其對大鼠血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs） Suv39h1的過表達(dá)效應(yīng)；2.構(gòu)建攜帶大鼠Suv39h1基因RNA干擾序列的重組慢病毒載體（LV-Suv39h1shRNA）,觀察其對VSMCs的Suv39h1表達(dá)沉默效應(yīng)；3.探討過表達(dá)或沉默Suv39h1,對血管緊張素Ⅱ （angiotensinⅡ, AngⅡ）和高糖（high glucose, HG）誘導(dǎo)的VSMCs增殖和遷移的作用及其分子機(jī)制；4.探討過表達(dá)或沉默Suv39h1,對糖尿�。╠iabetes mellitus, DM）大鼠頸動脈球囊損傷后血管內(nèi)膜增生和內(nèi)皮化的影響及其機(jī)制。方法：1.經(jīng)鑒定構(gòu)建成功的穿梭質(zhì)粒pDC316-Suv39h1,與骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞,同源重組獲得Ad-Suv39h1。經(jīng)擴(kuò)增、純化、PCR鑒定后,測定獲得的重組腺病毒載體滴度。重組腺病毒按感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection, MOI）0,10,15,20,25,30轉(zhuǎn)染VSMCs... 

【文章來源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

pDC316-Suv39hl載體酶切后電泳圖

重組質(zhì)粒測序圖

穿梭質(zhì)粒pDC316-Suv39hl和骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染對數(shù)生長期的293細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染后8d，細(xì)胞出現(xiàn)了明顯的唾斑，出毒跡象明顯（圖1.3A)，表明同源重組構(gòu)建腺病毒成功。重組腺病毒Ad-Suv39hl經(jīng)擴(kuò)增收集的第二代毒種，PCR擴(kuò)增，凝膠電泳成像后顯示，在目的條帶1241bp附近出現(xiàn)明顯亮帶（圖1.3B)，表明收獲的病毒為構(gòu)建成功的重組Ad-Suv39hl。10

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Inhibitory Effects of Suppressor of Cytokine Signaling 3 on Inflammatory Cytokine Expression and Migration and Proliferation of IL-6/IFN-γ-induced Vascular Smooth Muscle Cells[J]. 向水,董念國,劉金平,王玉,史嘉瑋,魏戰(zhàn)杰,胡行健,龔立.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2013(05)



本文編號：2954351