TRIM21是三基序蛋白家族的成員之一,與多種病毒的復制增殖相關,但其與EMCV感染的研究機制尚不明確。該研究采用脂質體介導法將構建成功的TRIM21的真核表達質粒pcDNA3.1-TRIM21以及針對該靶點的小RNA干擾序列瞬時轉染至HEK293和HeLa細胞,探討細胞內TRIM21的表達對腦心肌炎病毒復制增殖的影響,并進一步進行機制研究。結果顯示, TRIM21在細胞中成功過表達; EMCV感染24 h后進行檢測,結果證明,過表達TRIM21組病毒滴度、病毒拷貝數(shù)及病毒蛋白均低于對照組。RNA干擾實驗下調TRIM21后,病毒滴度、病毒拷貝數(shù)及病毒蛋白顯著高于對照組。此外,機制研究提示, TRIM21可正調節(jié)II型干擾素及促炎性因子IL-6的轉錄,從而抑制EMCV的增殖。以上結果表明, TRIM21與EMCV的復制增殖密切相關,可能通過對IFN信號通路部分蛋白及促炎性因子的調控參與對病毒復制增殖的影響。 

【文章來源】：中國細胞生物學學報. 2019年12期

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

TRIM21下調對EMCV感染的影響

將外源基因轉染HEK293細胞后提取RNA進行基因水平的檢測。圖3A顯示,轉染組TRIM21基因表達較空載組顯著提高(P<0.001),提示外源TRIM21在基因水平成功表達。Western blot檢測結果顯示,與空載組相比,TRIM21的表達量隨著TRIM21濃度的增加而增加,呈劑量依賴性關系(圖3B),TRIM21瞬時過表達成功。圖2 TRIM21基因的擴增及雙酶切驗證

圖1 EMCV感染細胞后TRIM21的表達量檢測瞬時過表達TRIM21后進行EMCV感染實驗,接毒量為0.01 MOI。接毒后收集上清和細胞,檢測細胞胞內和胞外的病毒滴度。結果顯示,隨著TRIM21濃度的增加,細胞內和細胞外病毒滴度也逐漸減少,當TRIM21濃度為1.5μg時,病毒滴度顯著下降(圖3C和圖3D,P<0.05)。后期,本實驗嘗試用較高濃度的TRIM21質粒轉染細胞,發(fā)現(xiàn)當濃度高于1.5μg時對細胞活力產生了影響(結果未顯示)。為了驗證TRIM21在不同細胞中是否有相同的作用,在HeLa細胞中做了同樣的實驗。在基因(圖3E)和蛋白(圖3F)水平檢測TRIM21過表達后,EMCV VP1蛋白和EMCV 3D(圖3G)的表達被明顯抑制。這一結果提示,TRIM21的表達量與EMCV增殖呈負相關。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]豬腦心肌炎病毒NJ08株基因組序列測定與分析[J]. 白娟,蔣康富,李玉峰,王先煒,姜平.  中國預防獸醫(yī)學報. 2011(05)

博士論文
[1]E3泛素連接酶TRIM4和TRIM21調節(jié)細胞抗病毒天然免疫信號轉導的機制[D]. 燕杰.武漢大學 2012
[2]人IFN-γ在表達HBsAg肝細胞中的特異性表達及其體外抑制乙肝病毒的作用[D]. 李朵璐.鄭州大學 2010

碩士論文
[1]金蕎麥對克雷伯桿菌肺炎大鼠的保護作用及其機制[D]. 汪春彥.安徽醫(yī)科大學 2011



本文編號：2952872