發(fā)布時間：2020-12-27 14:31

　　研究背景脂肪是人體重要的能量提供者,但是多余的脂肪往往導(dǎo)致肥胖等疾病,反而成為“廢品”。肥胖、動脈粥樣硬化、胰島素抵抗等疾病都與脂肪組織功能障礙相關(guān),脂肪的生長發(fā)育又與脂肪干細(xì)胞（adipose-derived stem cells,ASCs）的增殖、分化密切相關(guān)。ASCs是一類具有自我復(fù)制能力的多向分化潛能細(xì)胞,如成脂肪、成骨、成軟骨、成肝細(xì)胞、成神經(jīng)細(xì)胞樣等分化。ASCs具有取材容易,來源廣泛,適宜大規(guī)模培養(yǎng)等特點(diǎn),為目前組織工程領(lǐng)域研究最活躍的成體干細(xì)胞之一。轉(zhuǎn)錄因子 CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白 α（CCAAT/enhancer binding protein α,C/EBPα）和過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator-activated receptors,PPARy）是干細(xì)胞成脂分化的主要調(diào)控因子,它們促進(jìn)脂肪特異基因表達(dá),誘導(dǎo)干細(xì)胞成脂分化。MicroRNA（miRNA）是一類長約22 nt的具有調(diào)控功能的非編碼RNA。它可通過堿基互補(bǔ)配對的方式,與靶基因全部或部分結(jié)合,降解靶基因或者阻遏靶基因的翻譯,從而對細(xì)胞起調(diào)控作用。最近一些研究... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１基于Ｃ／ＥＢＰａ的多種軟件篩選靶點(diǎn)ｍｉＲＮＡ

ＡＧ＝?－２３．５?ｋｃａｌ／ｍｏｌ?ＡＧ＝?－２４．８?ｋｃａｌ／ｍｏｌ??３＇?ｈｓａ－ｍｉＲ－３２６?ｈｓａ－ｍｉＲ－３２６??？ａ?Ｃ?Ｃ?Ｃ?５＇?ＧＯ?Ｃ?５＇??ＣＣＵ?ＣＵＵＣ?ＧＧＧＵＣＵＣＣ?ＧＡＣＣＵ?ＵＵＣＣ?ＧＧＧＵＣＵＣＣ??５—Ａｆ＾Ａ?ＣＧｋｋ％?ｕＣ＇Ｃ＇Ｃ＇Ａ＾〇－－－ｙ?５—ｃ９＾ｃ?ｃＡＡＧＧ，?＿＿３，??８６７?ＣＡ?Ｃ?Ｃ?８９９?１２１３?Ｇ?Ｃ?Ｖｊ?ｌ？?１２４４??Ｇ?Ｃ?ＣＣ?Ｇ??Ａ?Ｕ??ｕｃａＧ?ＣＥＢＰＡ＿３．ＵＴＲ??ＣＥＢＰＡ＿３．ＵＴＲ??圖?１－２?Ｃ／ＥＢＰａ?的?３’?ＵＴＲ?上?ｈｓａ－ｍｉＲ－３２６?靶位點(diǎn)分析。Ａ：?Ｃ／ＥＢＰｃｔ?３’?ＵＴＲ?上第?１?個??ｈｓａ－ｍｉＲ－３２６?靶位點(diǎn)。Ｂ：?Ｃ／ＥＢＰａ?３’?ＵＴＲ?上第?２?個?ｈｓａ－ｍｉＲ－３２６?靶位點(diǎn)。??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔａｒｇｅｔ?ｓｉｔｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｈｓａ－ｍｉＲ－３２６?ｏｎ?Ｃ／ＥＢＰａ?３’ＵＴＲ．?Ａ：?Ｔｈｅ?ｆｉｒｓｔ?ｔａｒｇｅｔ?ｓｉｔｅ?ｏｆ??ｈｓａ－ｍｉＲ－３２６?ｏｎ?Ｃ／ＥＢＰａ?３’ＵＴＲ．?Ｂ：?Ｔｈｅ?ｓｅｃｏｎｄ?ｔａｒｇｅｔ?ｓｉｔｅ?ｏｆ?ｈｓａ－ｍｉＲ－３２６?ｏｎ?Ｃ／ＥＢＰａ??３，ＵＴＲ．??２．?２?ｈＡＳＣｓ的常規(guī)培養(yǎng)??ｈＡＳＣｓ在接種２４ｈ后完全貼壁，細(xì)胞為長梭形，核圓形或橢圓形；２ｄ后細(xì)??胞匯合度達(dá)９０％，呈集落樣螺旋形生長。??

??３０００？５０００?ｂｐ和１０００？２０００?ｂｐ處均有一亮帶，Ｔ５載體的大小為３９５５?ｂｐ（圖２－３），??故電泳結(jié)果與理論值相符。??Ａ?Ｍ?■?Ｂ?１?Ｍ?２??＾ｈｈｈ｜??■ＶＩ—＿０??ｈ＾＝９｜｜?ｈｎｔｉ？??５（）ｕ—＾?５００??２５０－＾＾＾Ｈ?＾—２５０??ｌｏｏ—＾—１〇〇??圖?２－１?Ｃ／ＥＢＰａ?的?３’?ＵＴＲ?克隆。Ａ：?Ｃ／ＥＢＰａ?３’?ＵＴＲ?擴(kuò)增，Ｍ：?ｍａｒｋｅｒ，?１：?Ｃ／ＥＢＰｃｔ?３’?ＵＴＲ??的ＰＣＲ產(chǎn)物。Ｂ：?Ｃ／ＥＢＰａ?３’?ＵＴＲ－Ｔ５重組質(zhì)粒電泳鑒定，Ｍ：?ｍａｒｋｅｒ，?１：菌液ＰＣＲ??驗(yàn)證，２：雙酶切驗(yàn)證。??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｃｌｏｎｉｎｇ?ｏｆ?Ｃ／ＥＢＰｏｔ?３’ＵＴＲ．?Ａ：?Ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｃ／ＥＢＰａ?３’ＵＴＲ，Ｍ：?ｍａｒｋｅｒ，?１：??Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｃ／ＥＢＰａ?３’ＵＴＲ．?Ｂ：?Ｅｖａｌｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｏｆ??Ｃ／ＥＢＰａ?３５ＵＴＲ－Ｔ５，?Ｍ：?ｍａｒｋｅｒ，?１：?ＰＣＲ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ，?２：?Ｄｏｕｂｌｅ?Ｅｎｚｙｍｅｓ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ．??Ｉ?１??ｍｍ??圖２－２大腸桿菌感染重組載體質(zhì)粒后在平板的生長情況。??Ｆｉｇ．?２－２?Ｔｈｅ?ｇｒｏｗｔｈ?ｓｉｔｕａｔｉｏｎ?ａｆｔｅｒ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ?ｉｎｔｏ?Ｅ．ｃｏｌｉ．??２６??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]用于篩選shRNA的新型雙螢光素酶報告基因載體的構(gòu)建及應(yīng)用[J]. 胡志嵩,劉欣禹,杜曉,歐陽清,李昂,楊安鋼,趙晶,閻博.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2017(21)
[2]實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)應(yīng)用于核酸定量檢測的研究進(jìn)展及展望[J]. 任廣睦,劉季,王英元.  山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2006(09)

碩士論文
[1]雙熒光素酶報告基因檢測miR-185與AKT1靶標(biāo)關(guān)系[D]. 曹大龍.蚌埠醫(yī)學(xué)院 2015



本文編號：2941912