c-Abl （cellular Abelson gene product, c-Abl）是非受體酪氨酸激酶超家族Abelson的成員,在細胞生長和生存的許多重要信號通路,如細胞骨架重塑、細胞遷移和粘附、受體內吞作用、自噬、DNA損傷反應和細胞凋亡、促進自噬體進入溶酶體以及溶酶體組件的正常工作等方面都有重要作用。受到氧化壓力刺激,c-Abl進入線粒體可以介導線粒體功能損傷和細胞死亡。正常情況下,細胞內c-Abl活性比較低,電離輻射或氧化應激時被激活。由于染色體易位形成BCR-Abl融合基因,其編碼的BCR-ABL融合蛋白呈組成性激活狀態(tài),是導致慢性粒細胞性白血�。–ML）的主要原因。c-Abl的抑制劑STI571（又稱伊馬替尼,格列衛(wèi)）是90年代開發(fā)的酪氨酸激酶抑制劑類藥物,是全世界第一個靶向小分子藥物,在BCR-Abl陽性急、慢性白血病的治療中發(fā)揮了重要作用。持續(xù)使用該藥的病人,其預期壽命已與正常人群沒有顯著區(qū)別。有文獻中已經報道STI571可以升高細胞的活性氧水平,同時將表皮生長因子抑制劑聯合STI571用藥可協同促進非小細胞肺癌細胞凋亡。線粒體是真核細胞氧化產能的重要場所,它通過內... 

【文章來源】：安徽大學安徽省 211工程院校

【文章頁數】：45 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 c-Abl和c-Abl抑制劑
    1.2 線粒體和活性氧族
    1.3 線粒體自噬（mitophagy）
    1.4 AIF
    1.5 本課題擬解決的科學問題
第二章 材料與方法
    2.1 分子克隆
        2.1.1 試劑
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 定點突變質粒構建、EGFP熒光質粒構建
    2.2 細胞實驗
        2.2.1 試劑及配方
        2.2.2 細胞培養(yǎng)與傳代
        2.2.3 免疫印記（內源性磷酸化/外源性磷酸化）
        2.2.4 質譜鑒定磷酸化位點
        2.2.5 免疫熒光檢測線粒體損傷和AIF在線粒體上的定位
        2.2.6 流式細胞術檢測ROS
        2.2.7 AIF敲低細胞系的建立
第三章 結果
    3.1 AIF酪氨酸磷酸化修飾位點鑒定
        3.1.1 質譜檢測AIF酪氨酸磷酸化修飾位點
        3.1.2 免疫印記驗證AIF的酪氨酸磷酸化修飾位點
    3.2 AIF敲低的A549細胞系線粒體呈現片段化損傷
        3.2.1 AIF敲低細胞系的構建結果
        3.2.2 AIF RNAi對A549細胞線粒體形態(tài)的影響
    3.3 c-Abl抑制劑可能通過AIF介導的線粒體的損傷
        3.3.1 c-Abl抑制劑對線粒體的損傷有時間和劑量依賴性,線粒體內膜蛋白AIF與線粒體共定位異常
        3.3.2 線粒體錨定型AIF緩解c-Abl抑制劑對線粒體的損傷
    3.4 AIF敲低對c-Abl抑制劑誘導A549細胞ROS水平升高的影響
    3.5 c-Abl特異性抑制劑尼洛替尼可以誘導線粒體自噬并且抑制自噬體的清除
    3.6 討論
        3.6.1 c-Abl抑制劑STI571通過改變AIF的定位、升高ROS水平介導線粒體損傷
        3.6.2 c-Abl抑制劑誘導線粒體自噬,抑制自噬流
參考文獻
致謝



本文編號：2935464