小鼠NLRP3基因腺病毒干擾載體的構建及功能鑒定
發(fā)布時間:2020-12-23 13:29
目的構建針對小鼠NLRP3基因的腺病毒干擾載體(Ad-NLRP3-shRNA),并在Min6和RAW264.7細胞中驗證其基因沉默效率。方法針對小鼠NLRP3基因設計、合成3對NLRP3 shRNA 1-3干擾序列,重組至pHBAd-U6-CMV質粒載體。在HEK293T細胞內包裝Ad-NLRP3-shRNA。感染Min6和RAW264.7細胞后,采用實時定量-聚合酶鏈式反應(RTQ-PCR)檢測NLRP3基因表達。結果 Ad-NLRP3-shRNA 1-3在Min6和RAW264.7細胞的干擾效率分別達到44.38%、46.61%和82.83%以及47.23%、49.59%和78.64%。結論成功構建出Ad-NLRP3-shRNA載體,為研究NLRP3基因的功能提供有效工具。
【文章來源】:右江民族醫(yī)學院學報. 2019年05期
【文章頁數】:4 頁
【文章目錄】:
1 資料與方法
1.1 主要菌株和試劑
1.2 實驗方法
1.2.1 Ad-NLRP3-shRNA的構建
1.2.2 Ad-NLRP3-shRNA包裝、收毒、擴增及滴度測定
1.2.3 Ad-NLRP3-shRNA功能驗證
1.3 統計學方法
2 結果
2.1 NLRP3 shRNA干擾質粒鑒定
2.2 Ad-NLRP3-shRNA包裝、收毒、擴增及滴度測定結果
2.3 Ad-NLRP3-shRNA對Min6和RAW264.7細胞中NLRP3基因表達的影響
3 討論
【參考文獻】:
期刊論文
[1]脂肪代謝障礙與抗炎治療策略[J]. 徐春陽,李文蘭,楊秀穎,強桂芬,杜冠華. 中藥藥理與臨床. 2018(05)
[2]NLRP3炎癥小體在糖化終末產物誘導的小鼠胰島β細胞損傷中的作用研究[J]. 孔祥,蘇青,張洪梅,林寧,李曉永,楊震,鄧儒元,劉沖霄,金杰,孟廣勛. 中華內分泌代謝雜志. 2018 (08)
[3]NLRP3炎癥小體與糖尿病慢性并發(fā)癥的關系及中藥干預作用[J]. 孫青,梁曉春. 中國醫(yī)學科學院學報. 2018(01)
[4]DDX46基因慢病毒載體的構建及其在人膀胱癌細胞中的表達[J]. 劉熹,張沖,黃鄧高,曹卉,高元慧,張淑芳,彭大為. 安徽醫(yī)學. 2018(01)
[5]基因沉默策略及其應用研究進展[J]. 周曉楠,宋雪蘭,楊媛,馬琛婧,何芳雁. 昆明醫(yī)科大學學報. 2018(01)
[6]代謝性炎癥綜合征發(fā)病機制的研究進展[J]. 黎汝楣,胡仁明. 復旦學報(醫(yī)學版). 2017(03)
[7]大鼠Hes1腺病毒干擾載體構建及功能鑒定[J]. 周學亮,方義湖,趙勇,鄒斌,徐華,吳起才,劉季春. 重慶醫(yī)學. 2016(34)
[8]NLRP3炎癥小體與2型糖尿病的研究進展[J]. 王定坤,陳廣,陸付耳. 生理科學進展. 2014(02)
[9]NLRP3炎性體與2型糖尿病研究進展[J]. 冉艷,陳建忠. 細胞與分子免疫學雜志. 2013(12)
本文編號:2933797
【文章來源】:右江民族醫(yī)學院學報. 2019年05期
【文章頁數】:4 頁
【文章目錄】:
1 資料與方法
1.1 主要菌株和試劑
1.2 實驗方法
1.2.1 Ad-NLRP3-shRNA的構建
1.2.2 Ad-NLRP3-shRNA包裝、收毒、擴增及滴度測定
1.2.3 Ad-NLRP3-shRNA功能驗證
1.3 統計學方法
2 結果
2.1 NLRP3 shRNA干擾質粒鑒定
2.2 Ad-NLRP3-shRNA包裝、收毒、擴增及滴度測定結果
2.3 Ad-NLRP3-shRNA對Min6和RAW264.7細胞中NLRP3基因表達的影響
3 討論
【參考文獻】:
期刊論文
[1]脂肪代謝障礙與抗炎治療策略[J]. 徐春陽,李文蘭,楊秀穎,強桂芬,杜冠華. 中藥藥理與臨床. 2018(05)
[2]NLRP3炎癥小體在糖化終末產物誘導的小鼠胰島β細胞損傷中的作用研究[J]. 孔祥,蘇青,張洪梅,林寧,李曉永,楊震,鄧儒元,劉沖霄,金杰,孟廣勛. 中華內分泌代謝雜志. 2018 (08)
[3]NLRP3炎癥小體與糖尿病慢性并發(fā)癥的關系及中藥干預作用[J]. 孫青,梁曉春. 中國醫(yī)學科學院學報. 2018(01)
[4]DDX46基因慢病毒載體的構建及其在人膀胱癌細胞中的表達[J]. 劉熹,張沖,黃鄧高,曹卉,高元慧,張淑芳,彭大為. 安徽醫(yī)學. 2018(01)
[5]基因沉默策略及其應用研究進展[J]. 周曉楠,宋雪蘭,楊媛,馬琛婧,何芳雁. 昆明醫(yī)科大學學報. 2018(01)
[6]代謝性炎癥綜合征發(fā)病機制的研究進展[J]. 黎汝楣,胡仁明. 復旦學報(醫(yī)學版). 2017(03)
[7]大鼠Hes1腺病毒干擾載體構建及功能鑒定[J]. 周學亮,方義湖,趙勇,鄒斌,徐華,吳起才,劉季春. 重慶醫(yī)學. 2016(34)
[8]NLRP3炎癥小體與2型糖尿病的研究進展[J]. 王定坤,陳廣,陸付耳. 生理科學進展. 2014(02)
[9]NLRP3炎性體與2型糖尿病研究進展[J]. 冉艷,陳建忠. 細胞與分子免疫學雜志. 2013(12)
本文編號:2933797
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