目的構(gòu)建針對小鼠NLRP3基因的腺病毒干擾載體（Ad-NLRP3-shRNA）,并在Min6和RAW264.7細(xì)胞中驗證其基因沉默效率。方法針對小鼠NLRP3基因設(shè)計、合成3對NLRP3 shRNA 1-3干擾序列,重組至pHBAd-U6-CMV質(zhì)粒載體。在HEK293T細(xì)胞內(nèi)包裝Ad-NLRP3-shRNA。感染Min6和RAW264.7細(xì)胞后,采用實時定量-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RTQ-PCR）檢測NLRP3基因表達。結(jié)果 Ad-NLRP3-shRNA 1-3在Min6和RAW264.7細(xì)胞的干擾效率分別達到44.38%、46.61%和82.83%以及47.23%、49.59%和78.64%。結(jié)論成功構(gòu)建出Ad-NLRP3-shRNA載體,為研究NLRP3基因的功能提供有效工具。 

【文章來源】：右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2019年05期

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 資料與方法
    1.1 主要菌株和試劑
    1.2 實驗方法
        1.2.1 Ad-NLRP3-shRNA的構(gòu)建
        1.2.2 Ad-NLRP3-shRNA包裝、收毒、擴增及滴度測定
        1.2.3 Ad-NLRP3-shRNA功能驗證
    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 NLRP3 shRNA干擾質(zhì)粒鑒定
    2.2 Ad-NLRP3-shRNA包裝、收毒、擴增及滴度測定結(jié)果
    2.3 Ad-NLRP3-shRNA對Min6和RAW264.7細(xì)胞中NLRP3基因表達的影響
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]脂肪代謝障礙與抗炎治療策略[J]. 徐春陽,李文蘭,楊秀穎,強桂芬,杜冠華.  中藥藥理與臨床. 2018(05)
[2]NLRP3炎癥小體在糖化終末產(chǎn)物誘導(dǎo)的小鼠胰島β細(xì)胞損傷中的作用研究[J]. 孔祥,蘇青,張洪梅,林寧,李曉永,楊震,鄧儒元,劉沖霄,金杰,孟廣勛.  中華內(nèi)分泌代謝雜志. 2018 (08)
[3]NLRP3炎癥小體與糖尿病慢性并發(fā)癥的關(guān)系及中藥干預(yù)作用[J]. 孫青,梁曉春.  中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報. 2018(01)
[4]DDX46基因慢病毒載體的構(gòu)建及其在人膀胱癌細(xì)胞中的表達[J]. 劉熹,張沖,黃鄧高,曹卉,高元慧,張淑芳,彭大為.  安徽醫(yī)學(xué). 2018(01)
[5]基因沉默策略及其應(yīng)用研究進展[J]. 周曉楠,宋雪蘭,楊媛,馬琛婧,何芳雁.  昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2018(01)
[6]代謝性炎癥綜合征發(fā)病機制的研究進展[J]. 黎汝楣,胡仁明.  復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2017(03)
[7]大鼠Hes1腺病毒干擾載體構(gòu)建及功能鑒定[J]. 周學(xué)亮,方義湖,趙勇,鄒斌,徐華,吳起才,劉季春.  重慶醫(yī)學(xué). 2016(34)
[8]NLRP3炎癥小體與2型糖尿病的研究進展[J]. 王定坤,陳廣,陸付耳.  生理科學(xué)進展. 2014(02)
[9]NLRP3炎性體與2型糖尿病研究進展[J]. 冉艷,陳建忠.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2013(12)



本文編號：2933797