目的紅細(xì)胞是血液的重要組成成分,其主要功能就是通過血液循環(huán)來運(yùn)輸氧氣到達(dá)機(jī)體的各個(gè)部位,以促進(jìn)機(jī)體的正常運(yùn)行。但研究證實(shí)人成熟紅細(xì)胞的壽命只有120天左右,為了維持機(jī)體內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)量的穩(wěn)定,成年骨髓中每秒需產(chǎn)生約200萬個(gè)紅細(xì)胞,此過程就被稱為紅系發(fā)育。它是從最初的造血干細(xì)胞開始,依次經(jīng)歷紅系早期分化、紅系終末分化以及脫核成熟等三個(gè)大階段,才形成了功能齊全的成熟紅細(xì)胞。這是一個(gè)受到多種機(jī)制嚴(yán)格調(diào)控的復(fù)雜過程,一旦某個(gè)發(fā)育過程紊亂就會(huì)引起相應(yīng)血液疾病的發(fā)生,在對這些血液疾病的研究中,發(fā)現(xiàn)諸如真性紅細(xì)胞增多癥等多種血液病病人中,p27kip1（以下簡寫為“p27”）基因一般都會(huì)發(fā)生突變,導(dǎo)致其表達(dá)量下調(diào),且目前已有多篇文獻(xiàn)報(bào)道該基因與紅系相關(guān)血液病有密切聯(lián)系。因此,在紅系發(fā)育過程中研究p27基因具有十分重要的實(shí)際意義。方法首先運(yùn)用生物信息學(xué)方法對p27及其家族進(jìn)行基因結(jié)構(gòu)、蛋白結(jié)構(gòu)及表達(dá)情況和進(jìn)化關(guān)系等分析。成功構(gòu)建p27敲低載體并用RT-q PCR來檢測其表達(dá),以驗(yàn)證敲低效率。運(yùn)用血細(xì)胞計(jì)數(shù)法、聯(lián)苯胺染色法、流式細(xì)胞術(shù)等方法來檢測敲低p27基因后對K562、HEL和CD34+細(xì)胞的增殖、分... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

紅系分化發(fā)育的過程

圖 1.2 p27 基因在骨髓纖維化病中的表達(dá)情況因是一種非常常見的廣譜性抑癌基因，在 1994 年，Po細(xì)胞中 TGF-β 的生長功能性研究中發(fā)現(xiàn)了一種熱穩(wěn)定為 27 kD[22]，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，這種蛋白主要在細(xì)胞周期中 cyclin E 和 CDK2 的復(fù)合體相互結(jié)合，從而以一種化學(xué)2的激酶活性，使細(xì)胞周期停滯在G1期，而這個(gè)蛋白就hibitor 1B（CDKN1B），[23]并與之前已發(fā)現(xiàn)的 p21cip1基因組成了一個(gè) cip/kip 家族。p27kip1基因位于人體第 2p13.1 交界處，在基因結(jié)構(gòu)上含有 2 個(gè)內(nèi)含子和 3 個(gè)外子是不可以編碼的，另 2 個(gè)外顯子可以編碼一個(gè)由 19即 p27kip1蛋白，它的相對分子質(zhì)量約為 27KD，在蛋白合的結(jié)構(gòu)域，而 C 端有兩個(gè)分開的核定位信號(hào)。Toylin D-CDK4 相互作用的蛋白時(shí)，拷貝了人、鼠和貂的 和氨基酸的序列長度，對比這個(gè)結(jié)果顯示人、鼠、貂三

p27kip1的 Thr187磷酸化保證了其在細(xì)胞核中的定位，進(jìn)而促化蛋白酶體降解途徑，泛素蛋白酶體途徑是機(jī)體內(nèi)介導(dǎo)蛋白質(zhì)降解機(jī)制，通過這個(gè)途徑是體內(nèi)蛋白維持在一個(gè)平衡狀態(tài)。這一調(diào)控過件主要包括泛素和它的激活酶系統(tǒng)以及蛋白酶體系統(tǒng)，泛素激活酶活泛素，并將其與待降解的蛋白質(zhì)結(jié)合起來，從而形成目標(biāo)蛋白聚泛素化，而蛋白酶體系統(tǒng)則能夠識(shí)別已經(jīng)被泛素化的目的蛋白并將細(xì)胞核中，Thr187磷酸化的 p27kip1可以被 F-box 蛋白所識(shí)別，而 F-組成 SCFSKP2復(fù)合體，這個(gè)復(fù)合體是 E3 泛素連接酶的重要組成成分使 p27kip1進(jìn)入泛素化蛋白酶體降解途徑發(fā)生降解。Ser10磷酸化的 合 CRM1 發(fā)生出核運(yùn)動(dòng)，而在細(xì)胞質(zhì)中可以被 KPC1 復(fù)合體所識(shí)別PC1 復(fù)合體也是一種 E3 泛素連接酶的重要組成成分，可以實(shí)現(xiàn) p27中的降解[35]。但是，目前在紅系發(fā)育過程中對 p27 基因的研究還比進(jìn)行進(jìn)一步的研究。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]白血病干細(xì)胞表面分子標(biāo)志物及分化抗原高表達(dá)與難治性急性白血病[J]. 王榮華,陳信義,褚雨霆,侯麗,王婧,許亞梅.  醫(yī)學(xué)綜述. 2012(13)
[2]細(xì)胞周期蛋白激酶抑制因子p27 Kip1研究進(jìn)展[J]. 陶金程,漢麗梅,劉佳,于天明.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2011(05)
[3]人腦膠質(zhì)瘤中miR-221和p27的表達(dá)及臨床意義[J]. 趙鵬,陸小明,傅震,魯艾林,陳云祥,劉寧,尤永平.  江蘇醫(yī)藥. 2009(11)
[4]我國白血病流行病學(xué)調(diào)查的現(xiàn)狀和對策[J]. 黃治虎,陳寶安,歐陽建,沈志祥,王彥艷,余小金.  臨床血液學(xué)雜志. 2009(02)
[5]MicroRNA與腦發(fā)育及神經(jīng)系統(tǒng)疾病[J]. 張春智,浦佩玉.  醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志. 2008(01)
[6]p27研究進(jìn)展[J]. 謝啟超.  國外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊). 2003(01)



本文編號(hào)：2933354