發(fā)布時間：2020-12-17 12:53

　　目的殺蟲劑的大量、連續(xù)使用導(dǎo)致了蚊蟲抗藥性的發(fā)生和發(fā)展,研究蚊蟲抗藥性產(chǎn)生的機制并進(jìn)行適宜治理乃當(dāng)務(wù)之急。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的不斷發(fā)展,針對不同的物種,越來越多的抗藥性基因被陸續(xù)發(fā)現(xiàn)。庫蚊是淋巴絲蟲病和腦炎的傳播媒介,其抗藥性的產(chǎn)生成為媒介病防治的一大難題。淡色庫蚊主要分布在我國北方地區(qū),本課題針對淡色庫蚊對氯氰菊酯產(chǎn)生抗性的機制與鐵代謝相關(guān)蛋白基因（鐵蛋白和鐵調(diào)節(jié)蛋白）是否存在一定關(guān)系進(jìn)行實驗研究,這對深入研究蚊蟲抗藥性機制具有重要的理論意義。方法設(shè)計引物,擴增目的基因全長、純化測序、序列分析,熒光定量PCR檢測鐵蛋白基因和鐵調(diào)節(jié)蛋白基因的表達(dá)水平。采用假設(shè)檢驗中的t檢驗方法,對兩種不同處理的淡色庫蚊樣本體內(nèi)鐵蛋白和鐵調(diào)節(jié)蛋白基因表達(dá)量進(jìn)行統(tǒng)計分析。分別擴增淡色庫蚊不同發(fā)育階段的基因片段,觀察隨系統(tǒng)發(fā)育鐵蛋白和鐵調(diào)節(jié)蛋白基因表達(dá)是否發(fā)生變化。CCK-8檢測C6/36細(xì)胞活力,構(gòu)建載體重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染C6/36細(xì)胞,測定轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒和空載質(zhì)粒細(xì)胞活力,觀察載入目的基因的C6/36細(xì)胞活力變化。結(jié)果通過以上實驗設(shè)計,我們成功擴增了淡色庫蚊鐵蛋白和鐵調(diào)節(jié)蛋白基因片段,經(jīng)熒光定量PCR測定,淡色... 

【文章來源】：濟南大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．１致倦庫蚊鐵蛋白基因蛋白編碼序列（ＣＤＳ）??－??

９６１?ａａｇｃｇｔａａｔｃ?ｔｔａｔｇｔａａｇａ?ｔａａｔｔｃａｇｔａ?ｃａｃａｃａｇｔｃａ?ａｔａａａａｔｇｔｔ?ｔｇａｔｔａｇｇａ??／＿／??圖２．１致倦庫蚊鐵蛋白基因蛋白編碼序列（ＣＤＳ）??Ｄｉｓｔｒｆｃｕｔｊｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｔｏｐ?４６?Ｂｌａｓｔ?Ｈｉｔｓ?ｏｎ?２９?ｓｉｌｊｊｅｃｔ?ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ?ｂ－??Ｍｏｕｓｅ?ｏｖｅｒ?ｔｏ?ｓｅｅ?ｔｈｅ?ｔｉｔｌｅ?ｃｌｉｃｋ?ｔｏ?ｓｈｏｗ?ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ??Ｃｏｌｏｒ?ｋｅｙ?ｆｏｒ?ａｌｉｇｎｍｅｎｔ?ｓｃｏｒｅｓ??■?＜４０?＿?４０－５０?■?５０－８０?■?８０－２００?Ｂ?＞＝２００??１?２００?４００?６００?８００?１０００??圖２．２?ＸＭ?００１８４５６４８．１序列比對結(jié)果???表２．１鐵蛋白引物???Ｆｒｅｅｉｔｉｎ?Ｓｅｑｕｅｎｃｅ?（５’－３’）?Ｌｅｎｇｔｈ?ＧＣ％?Ｔｍ??Ｆｏｒｗａｒｄ?ｐｒｉｍｅｒ?ＣＧＣＣＧＴＣＣＴＧＴＣＣＴＴＣＴＡ?１８?５６．５?６１．１??Ｒｅｖｅｒｓｅ?ｐｒｉｍｅｒ?ＴＣＣＣＴＴＧＴＧＣＴＧＣＴＣＧＴＣ?１８?５７．１?６１，１??Ｐｒｏｄｕｃｔ?ｌｅｎｇｔｈ?４９６??②鐵調(diào)節(jié)蛋白引物設(shè)計選擇的核酸序列為同源性較高的致倦庫蚊的一段保??守區(qū)域，根據(jù)ＧｅｎＢａｎｋ序列號為ＡＹ４４５０７８．１的埃及伊蚊的鐵調(diào)節(jié)蛋白核酸序列??９??

喙氐鞍諄?蠐氳??馕每掛┬曰?菩緯曬叵檔難繡常崳?設(shè)計引物，同源性比對選擇高度保守區(qū)域，同源性比對結(jié)果如圖２．３。利用Ｐｒｉｍｅｒ??Ｐｒｅｍｉｅｒ＾設(shè)計引物，如表２．２。該基因同源性比對的高度保守核酸序列如下：??４２?１?ＡＴＣＧＣＡＴＣＣＴ?ＴＴＧＡＧＧＡＧＴＴ?ＣＡＡＧＧＡＡＣＴＣ??ＣＣＣＴＡＣＡＧＣＡ?ＴＣＣＧＴＧＴＴＣＴ?ＧＣＴＡＧＡＡＴＣＣ??４８?１?ＧＣＣＧＴＣＣＧＴＡ?ＡＣＴＧＣＧＡＣＡＡ?ＣＴＴＣＣＡＧＧＴＣ??ＣＴＣＧＡＧＡＡＧＧ?ＡＴＧＴＣＣＧＴＧＧ?ＣＡＴＣＴＴＧＡＧＣ??５４?１?ＴＧＧＡＡＧＧＣＧＡ?ＣＣＡＡＧＡＧＴＧＴ?ＣＡＡＡＡＣＣＧＡＣ??ＡＣＣＧＡＧＣＴＧＧ?ＡＧＡＴＣＣＣＧＴＴ?ＣＡＡＡＣＣＧＧＣＧ??６０?１?ＣＧＴＧＴＣＡＴＣＣ?ＴＧＣＡ


本文編號：2922077