冠狀病毒是一類能夠引起人類呼吸道感染的重要病原體,其感染可導(dǎo)致嚴(yán)重肺炎,甚至危及生命,目前還沒有有效藥物可以治療。冠狀病毒基因組可以編碼16個非結(jié)構(gòu)蛋白,其中非結(jié)構(gòu)蛋白3（non-structuralprotein3,nsp3）是最大的一個組分,包含多個功能性結(jié)構(gòu)域。其中,冠狀病毒的木瓜樣蛋白酶（papain-likeprotease,PLpro）是nsp3中一個重要的結(jié)構(gòu)域,它具有去泛素化酶活性和去ISG化活性,而它的去泛素化底物以及識別底物的機(jī)制仍然不完全清楚。蛋白質(zhì)的泛素化修飾是細(xì)胞中一種重要的翻譯后修飾,參與調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)許多生理活動,因此病毒在進(jìn)化過程中也演變得與泛素化修飾密不可分,一方面病毒可以利用泛素化促進(jìn)自身復(fù)制,另一方面宿主可以利用此通路抑制病毒復(fù)制。泛素化修飾在生物進(jìn)化過程中非常保守,涉及到一系列的酶參與反應(yīng),包括E1泛素激活酶、E2泛素結(jié)合酶以及E3泛素連接酶,而其中泛素化修飾的特異性主要由E3泛素連接酶來決定。膜相關(guān)RING-CH（Membrane-associated RING-CH,MARCH）蛋白是近年來才被發(fā)現(xiàn)的一類RING結(jié)構(gòu)域家族成員。目前有研究發(fā)現(xiàn)MA... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖５．冠狀病毒Ｓ蛋白區(qū)域示意圖??１２??

圖７是本研究??的技術(shù)路線圖

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ和ＭＨＶ?Ｓ蛋白在細(xì)胞中表達(dá)以及包裝到慢病毒顆粒情況??的影響，并通過熒光素酶報告系統(tǒng)進(jìn)一步確定ＭＡＲＣＨ８蛋白對Ｓ蛋白介導(dǎo)的慢病??毒顆粒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的影響。從圖９可以看出，在過表達(dá)ＭＡＲＣＨ８蛋白時，我們發(fā)現(xiàn)??ＭＡＲＣＨ８蛋白明顯抑制了?ＳＡＲＳ－ＣｏＶ和ＭＥＲＳ－ＣｏＶ?Ｓ蛋白的表達(dá)，但是對ＭＨＶ?Ｓ??蛋白的表達(dá)基本上沒有抑制作用。同樣我們也發(fā)現(xiàn)在慢病毒包裝細(xì)胞ＨＥＫ?２９３Ｔ中??過表達(dá)ＭＡＲＣＨ８蛋白時，抑制了?ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ?Ｓ蛋白包裝進(jìn)入慢病毒??顆粒中，而且攜帶ＳＡＲＳ－ＣｏＶ和ＭＥＲＳ－ＣｏＶ?Ｓ蛋白的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率也被抑制了。??但是在過表達(dá)ＭＡＲＣＨ８蛋白時對ＭＨＶ?Ｓ蛋白包裝進(jìn)入慢病毒顆粒以及其慢病毒轉(zhuǎn)??導(dǎo)效率幾乎沒有抑制作用。這些結(jié)果說明在過表達(dá)ＭＡＲＣＨ８蛋白時，很可能通過??降解ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ?Ｓ蛋白從而來抑制冠狀病毒的進(jìn)入，但是ＭＡＲＣＨ８??蛋白的表達(dá)對于ＭＨＶ?Ｓ蛋白基本上沒有影響。??２９??


本文編號：2919500