發(fā)布時間：2020-12-08 20:02

　　目的探討Treg細(xì)胞活化后對NKT細(xì)胞遷移的調(diào)控作用。方法分離純化小鼠脾臟Treg細(xì)胞及NKT細(xì)胞后,通過病毒感染的方式制備Foxp3修飾的Treg細(xì)胞;驗證Treg細(xì)胞的活化情況。體外共培養(yǎng)活化的Treg細(xì)胞和NKT細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測NKT的數(shù)量; RT-PCR及ELISA分析NKT細(xì)胞胞內(nèi)因子的分泌水平（IL-4、IFN-γ）。制備卵清白蛋白（OVA）致敏哮喘小鼠模型,體內(nèi)觀察Foxp3修飾的Treg細(xì)胞對NKT細(xì)胞體內(nèi)遷移的影響。結(jié)果經(jīng)Foxp3修飾后的Treg細(xì)胞（Le-Foxp3組）中Foxp3的表達(dá)明顯增加; CFSE標(biāo)記法檢測顯示Le-Foxp3組細(xì)胞可顯著抑制自體CD4+CD25-T效應(yīng)T細(xì)胞的增殖;同時ELISA檢測結(jié)果顯示相較于空載體轉(zhuǎn)染組（Le-scr組）,Le-Foxp3組細(xì)胞上清液中IL-10及TGF-β的水平顯著升高。經(jīng)transwell培養(yǎng)板體外共培養(yǎng)Treg細(xì)胞和NKT細(xì)胞后,流式細(xì)胞儀檢測下室中NKT細(xì)胞的數(shù)目結(jié)果顯示Le-Foxp3組為（221.15±79.36）,Le-scr組為（649.38±153.97）;同時IL-4及IFN-γ的水平顯著下... 

【文章來源】：中華肺部疾病雜志(電子版). 2019年05期 第601-605頁

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

表達(dá)Foxp3對Treg細(xì)胞功能的影響;注:A:CFSE標(biāo)記法檢測Treg細(xì)胞對Teff細(xì)胞的增殖抑制作用;B:ELISA檢測細(xì)胞因子IL-10和TGF-β的水平

細(xì)胞由Le-scr組的649．38±153．97減少至221．15±79．36(P＜0．05)。ＲT-PCＲ和ELISA檢測培養(yǎng)上清中IL-4和IFN-γ的水平，結(jié)果顯示(圖3):相較于Le-scr組，Le-Foxp3組共培養(yǎng)體系上清液中IL-4和IFN-γ的水平顯著降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。圖2表達(dá)Foxp3對Treg細(xì)胞功能的影響;注:A:CFSE標(biāo)記法檢測Treg細(xì)胞對Teff細(xì)胞的增殖抑制作用;B:ELISA檢測細(xì)胞因子IL-10和TGF-β的水平圖3ＲT-PCＲ(A)和ELISA(B)檢測表達(dá)Foxp3的Treg細(xì)胞對NKT細(xì)胞胞內(nèi)因子IL-4和IFN-γ分泌的影響四、OVA致哮喘小鼠模型中Treg細(xì)胞對NKT細(xì)胞體內(nèi)分布的影響本實驗進(jìn)一步引入OVA致哮喘小鼠模型，檢測哮喘發(fā)病過程中表達(dá)Foxp3后Treg細(xì)胞對NKT細(xì)胞體內(nèi)分布的影響。結(jié)果顯示(圖4)，相較于OVA組，OVA+Le-Foxp3組小鼠肺組織中NKT的數(shù)量顯著降低，而外周血及脾臟中NKT的數(shù)量顯著升高。因?qū)嶒炦^程中發(fā)現(xiàn)，OVA組和OVA+Le-scr組結(jié)果不具有顯著差異，故結(jié)果中未顯示OVA+Le-scr組數(shù)據(jù)。圖4OVA哮喘模型中Treg細(xì)胞對NKT細(xì)胞體內(nèi)分布的影響討論本文首先檢測了體外構(gòu)建的Foxp3病毒載體的轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果顯示Treg細(xì)胞中轉(zhuǎn)入Foxp3病毒載體后Foxp3的表達(dá)顯著升高，證明所構(gòu)建的載體可用于后續(xù)實驗。Foxp3是Treg細(xì)胞的特征標(biāo)志，也是其最重要的功能分子，大量研究表明高表達(dá)的Foxp3與Treg細(xì)胞免疫抑制功能之間有良好的相關(guān)性［13-14］。本文進(jìn)一步檢測了直接通過病毒載體表達(dá)Foxp3對Treg細(xì)胞功能的影響。結(jié)果?

?Treg細(xì)胞對NKT細(xì)胞胞內(nèi)因子IL-4和IFN-γ分泌的影響四、OVA致哮喘小鼠模型中Treg細(xì)胞對NKT細(xì)胞體內(nèi)分布的影響本實驗進(jìn)一步引入OVA致哮喘小鼠模型，檢測哮喘發(fā)病過程中表達(dá)Foxp3后Treg細(xì)胞對NKT細(xì)胞體內(nèi)分布的影響。結(jié)果顯示(圖4)，相較于OVA組，OVA+Le-Foxp3組小鼠肺組織中NKT的數(shù)量顯著降低，而外周血及脾臟中NKT的數(shù)量顯著升高。因?qū)嶒炦^程中發(fā)現(xiàn)，OVA組和OVA+Le-scr組結(jié)果不具有顯著差異，故結(jié)果中未顯示OVA+Le-scr組數(shù)據(jù)。圖4OVA哮喘模型中Treg細(xì)胞對NKT細(xì)胞體內(nèi)分布的影響討論本文首先檢測了體外構(gòu)建的Foxp3病毒載體的轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果顯示Treg細(xì)胞中轉(zhuǎn)入Foxp3病毒載體后Foxp3的表達(dá)顯著升高，證明所構(gòu)建的載體可用于后續(xù)實驗。Foxp3是Treg細(xì)胞的特征標(biāo)志，也是其最重要的功能分子，大量研究表明高表達(dá)的Foxp3與Treg細(xì)胞免疫抑制功能之間有良好的相關(guān)性［13-14］。本文進(jìn)一步檢測了直接通過病毒載體表達(dá)Foxp3對Treg細(xì)胞功能的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)表達(dá)Foxp3可提高Treg細(xì)胞對Teff細(xì)胞的增殖抑制率，同時促進(jìn)Treg細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-10和TGF-β。結(jié)果提示通過體外構(gòu)建Foxp3表達(dá)載體可直接活化Treg細(xì)胞，促進(jìn)其功能的發(fā)揮。早期有研究提示Treg細(xì)胞及NKT細(xì)胞在哮喘發(fā)病過程中存在相互調(diào)控作用［10-11］。故而本實驗通過體外共培養(yǎng)Treg細(xì)胞和NKT細(xì)胞，研究Treg細(xì)胞對NKT細(xì)胞功能的影響。Transwell共培養(yǎng)的結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染Foxp3后，遷移到下室的NKT細(xì)胞數(shù)量明顯減少，提示活化的Treg細(xì)胞可抑制NK

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：2905607