目的:Tudor-SN（Tudor Staphylococcal Nuclease）蛋白,又稱為p100、SND1（staphylococcal nuclease domain containing 1）,廣泛存在于人類、動(dòng)植物中,可參與基因轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞應(yīng)激、pre-mRNA剪切等多種生物學(xué)過(guò)程。本課題組的前期研究結(jié)果表明當(dāng)真核細(xì)胞受到外界刺激,如0.5mM亞砷酸鈉氧化應(yīng)激或45℃熱休克時(shí),Tudor-SN蛋白可以在細(xì)胞胞漿中形成顆粒狀聚集,參與應(yīng)激顆粒（Stress Granules,SGs）的構(gòu)成。SGs是真核細(xì)胞受到氧化應(yīng)激、熱休克、病毒感染等各種環(huán)境刺激時(shí)在胞漿中產(chǎn)生的顆粒狀結(jié)構(gòu),與mRNA代謝密切相關(guān)。本課題旨在深入探討Tudor-SN蛋白的真核細(xì)胞應(yīng)激生物學(xué)行為機(jī)制,主要關(guān)注應(yīng)激狀態(tài)下Tudor-SN蛋白的亞細(xì)胞定位與磷酸化分析。方法:本課題實(shí)驗(yàn)分為三部分,第一部分主要利用細(xì)胞免疫熒光（immunofluorescence,IF）技術(shù)分析不同應(yīng)激條件、不同細(xì)胞周期時(shí)相HeLa細(xì)胞內(nèi)Tudor-SN顆粒的形成情況,以及Tudor-SN應(yīng)激顆粒與細(xì)胞器、自噬顆粒的共定位關(guān)系;第二... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：117 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１人類Ｔｕｄｏｒ－ＳＮ蛋白結(jié)構(gòu)示意圖??

特異性抑制?ｍＴＯ民Ｃ１?（ｍｅ濁ａｎｉｓｔｉｃｔａｒｇｅｔｃｏｍｐｌｅｘ?１?ｏｆｒａｐａｍｙｃｉｎ），進(jìn)而誘導(dǎo)自喧??發(fā)生。Ｗ抗ＤＣＰｌａ和抗Ｇ３ＢＰ抗體可Ｗ檢測(cè)內(nèi)源性ＤＣＰｌａ?（ＰＢｓ的標(biāo)記蛋白）??和Ｇ３ＢＰ蛋白（Ｓ說(shuō)的標(biāo)記蛋白）的顆粒形成。如圖１．５所示，自嗤顆粒、加工??體、應(yīng)激顆粒并不存在共定位關(guān)系。此外，將ＰＥＲＦＰ－Ｃ１－Ｇ３ＢＰ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入??ＧＦＰ－ＬＣ３－ＨｅＬａ細(xì)胞，Ｗ活細(xì)胞工作站實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)應(yīng)激顆粒與自唆顆粒兩者的共定??位情況，結(jié)果（圖１．６）發(fā)現(xiàn)，在給予化２５?ｍＭ亞神酸鋼與３００ｎＭ雷帕霉素處??理４．化過(guò)程中，均未觀察到兩者的共定位。??２３??

扇圓圖圓固圍??Ｎｏｔｅ：?＃?ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ?＆?ｓｔｒｅｓｓ?ｇｒａｎｕｌｅｓ?？?Ｕｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ??圖１．４化ｄｏｒ－ＳＮ顆粒與自嗤顆粒的共定位分析??Ｆｉｇｕｒｅ?１．４?Ｔｈｅ?ｃｏ－ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?Ｔｕｄｏｒ－ＳＮ?ｇｒａｎｕｌｅｓ?ａｎｄ?ａ山ｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ．??為了進(jìn)一步確定自隨顆粒與應(yīng)激顆粒（ＳＧｓ）、加工體（ＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇＢｏ出ｅｓ，??ＰＢｓ）的相關(guān)化便進(jìn)行了Ｈ色巧光共定位分析。常規(guī)培養(yǎng)ＧＦＰ－ＬＣ３－ＨｅＬａ細(xì)胞，??給予化２５?ｍＭ亞神酸鋼與３００ｎＭ雷帕霉素（Ｒａｐａｍｙｃｉｎ）處理化。雷帕霉素可??特異性抑制?ｍＴＯ民Ｃ１?（ｍｅ濁ａｎｉｓｔｉｃｔａｒｇｅｔｃｏｍｐｌｅｘ?１?ｏｆｒａｐａｍｙｃｉｎ），進(jìn)而誘導(dǎo)自喧??發(fā)生。Ｗ抗ＤＣＰｌａ和抗Ｇ３ＢＰ抗體可Ｗ檢測(cè)內(nèi)源性ＤＣＰｌａ?（ＰＢｓ的標(biāo)記蛋白）??和Ｇ３ＢＰ蛋白（Ｓ說(shuō)的標(biāo)記蛋白）的顆粒形成。如圖１．５所示，自嗤顆粒、加工??體、應(yīng)激顆粒并不存在共定位關(guān)系。此外，將ＰＥＲＦＰ－Ｃ１－Ｇ３ＢＰ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入??ＧＦＰ－ＬＣ３－ＨｅＬａ細(xì)胞，Ｗ活細(xì)胞工作站實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)應(yīng)激顆粒與自唆顆粒兩者的共定??位情況，結(jié)果（圖１．６）發(fā)現(xiàn)，在給予化２５?ｍＭ亞神酸鋼與３００ｎＭ雷帕霉素處??理４．化過(guò)程中


本文編號(hào)：2904016