目的:探討沙眼衣原體（Chlamydia trachomatis,Ct）CT849蛋白在宿主細(xì)胞炎癥調(diào)節(jié)過程中起到的作用及有關(guān)機(jī)制,為進(jìn)一步了解Ct致病情況提供可靠的、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)支持。方法:CT849蛋白的表達(dá)與鑒定,從STD基因數(shù)據(jù)庫查獲ct849全基因序列進(jìn)行優(yōu)化密碼子合成獲取ct849基因序列,構(gòu)建p GEX-4T-1/ct849重組載體,測序鑒定;將重組載體p GEX-4T-1/ct849轉(zhuǎn)化至E.coli BL21（DE3）內(nèi)誘導(dǎo)表達(dá),采用純化、去內(nèi)毒素及BCA法檢測CT849蛋白濃度;用多粘菌素B去除CT849蛋白內(nèi)毒素后,先用PMA預(yù)處理THP-1細(xì)胞24h,再用濃度為0μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml的CT849蛋白分別刺激預(yù)處理的THP-1細(xì)胞24h,采用ELISA檢測隨CT849蛋白濃度的增加,TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8促炎細(xì)胞因子表達(dá)水平的變化;選擇濃度為10μg/ml的CT849蛋白在0h、6h、12h、24h和36h刺激THP-1細(xì)胞,采用ELISA檢測隨時(shí)間不同CT849蛋白對THP-1細(xì)胞產(chǎn)生T... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語索引
第1章 前言
第2章 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 主要的實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 菌株和細(xì)胞
    2.3 試劑盒
    2.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    2.5 其他
第3章 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 CT849蛋白在大腸桿菌中密碼子優(yōu)化后的表達(dá)
    3.2 CT849蛋白的去內(nèi)毒素處理
    3.3 THP-1細(xì)胞培養(yǎng)和模型建立
    3.4 ELISA檢測促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8表達(dá)水平
    3.5 Westernblot檢測
第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 CT849重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)與鑒定
    4.2 CT849蛋白誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞分泌促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8
    4.3 CT849蛋白促進(jìn)THP-1細(xì)胞ERK和JNK磷酸化
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間的科研成果
本研究受以下基金資助
致謝



本文編號：2902732