發(fā)布時(shí)間：2020-12-04 18:57

　　目的哺乳動(dòng)物精子的發(fā)生是一個(gè)極其復(fù)雜精細(xì)的過(guò)程,支持細(xì)胞作為生精小管中唯一的體細(xì)胞,不僅起著結(jié)構(gòu)上的支持作用,更發(fā)揮著營(yíng)養(yǎng)和調(diào)節(jié)的作用。最新進(jìn)展表明,組蛋白甲基化修飾在基因活性的調(diào)節(jié)中扮演著重要的角色。組蛋白H3K4甲基化由組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶（Histone Methyltransferases,HMTs）介導(dǎo)催化,與基因的轉(zhuǎn)錄激活相關(guān)。PTIP相關(guān)蛋白1（PTIP associated protein 1,PA1）是H3K4甲基轉(zhuǎn)移酶的核心組件,自從2007年被發(fā)現(xiàn)以后就一直備受關(guān)注,然而PA1在男性生殖系統(tǒng)中的表達(dá)及功能仍不清楚。為了探究PA1在男性生殖中的作用,我們首先觀察了PA1在小鼠睪丸不同發(fā)育階段的表達(dá)和定位;然后通過(guò)條件性基因敲除的方法獲得了支持細(xì)胞特異性Pa1敲除（Sertoli cell specific Pa1 knock out,SC-PA1KO）鼠,并對(duì)敲除鼠的生殖表型進(jìn)行了觀察,最后對(duì)支持細(xì)胞中Pa1敲除引起雄性不育的機(jī)制進(jìn)行了初步探索。方法1.選取不同年齡段小鼠,采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Reverse transcriptionpolymerase chai... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.支持細(xì)胞-支持細(xì)胞以及支持細(xì)胞-生精細(xì)胞細(xì)胞連接示意圖

圖 2. 組蛋白 H3K4 甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體結(jié)構(gòu)示意圖類(lèi) PA1 蛋白包含了 254 個(gè)氨基酸，并且沒(méi)有可識(shí)別的保守結(jié)構(gòu)域[58]。而小白包含了 253 個(gè)氨基酸，和人類(lèi) PA1 有 87%的氨基酸結(jié)構(gòu)相同[56]。理論上分子量大小為 28 KD，然而，可能由于其等電點(diǎn)較低，僅有 4.4，因此其在 S泳上顯示的條帶位于 42 KD[56]。ST pull-down assay 顯示 PA1 和 PTIP 之間存在直接作用，通過(guò) PA1 可以對(duì) P純[56]。由于 PTIP 是一個(gè)由 6 個(gè)串聯(lián) BRCT 結(jié)構(gòu)域組成的蛋白，每個(gè) BR都有與PA1相互作用的可能[56]。Zihua Gong等采用了基因敲除的手段，將P的 6 個(gè) BRCT 結(jié)構(gòu)域分別進(jìn)行敲除后觀察，當(dāng) PTIP 的第二個(gè) BRCT 結(jié)構(gòu)域他們發(fā)現(xiàn) PA1 的匯集戲劇般的降低了，作者在接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)接相互作用的是 PA1 的 N 端，而不是 C 端[59]。同時(shí)他們也在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)除的 U2OS 細(xì)胞，在 DNA 損傷區(qū)無(wú)法發(fā)生 PA1 的匯集，然而當(dāng)他們單獨(dú) 后，PTIP 卻可以在 DNA 損傷區(qū)域正常匯集，這個(gè)現(xiàn)象說(shuō)明了 PTIP 可以

圖 3. PA1 對(duì) DNA 電離損傷后的修復(fù)示意圖功能他們的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，Pa1 敲除后的胚胎表現(xiàn)出，然而其發(fā)育會(huì)停止在第 4-5 原節(jié)階段，同時(shí)其羊膜及絨毛膜均不同程度的表現(xiàn)出異常，并且胎兒出生。這一點(diǎn)和 Hongbing Zhang 對(duì)于 BM步研究發(fā)現(xiàn)，Pa1 敲除的胚胎其 BMP2 表達(dá)顯胚胎發(fā)育畸形是由于 BMP2 的表達(dá)受到影響作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究[65]。類(lèi)別轉(zhuǎn)換重排（class switch recombination, CSR）能產(chǎn)生多樣性。免疫球蛋白重鏈（IgH）基因的轉(zhuǎn)錄由含 B體調(diào)控，作用于 CSR 相關(guān)聯(lián)的 DNA 損傷區(qū)域


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