該課題探討了3D懸滴培養(yǎng)與貼壁培養(yǎng)體外誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUC-MSCs）在成軟骨分化特性上的差異。采用機(jī)械勻漿法和組織塊貼壁培養(yǎng)法體外分離培養(yǎng)獲得第5代h UC-MSCs,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)干細(xì)胞表面免疫標(biāo)記物,經(jīng)3D懸滴培養(yǎng)與貼壁培養(yǎng)誘導(dǎo)應(yīng)用番紅O和阿利辛藍(lán)染色及熒光定量檢測(cè)富含透明質(zhì)酸糖胺聚糖的細(xì)胞外基質(zhì)形成情況以及不同時(shí)間點(diǎn)（3天、7天、14天）成軟骨相關(guān)基因ACAN、MIA、COL1A2、COL2A1和COL10A1表達(dá),并用免疫組化染色的方法檢測(cè)II型膠原的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)的第5代h UC-MSCs間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物結(jié)果符合國際細(xì)胞療法協(xié)會(huì)制定的鑒定標(biāo)準(zhǔn); 3D懸滴培養(yǎng)的h UC-MSCs可形成致密的細(xì)胞聚合物,貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)成長梭形;番紅O和阿利辛藍(lán)染色結(jié)果顯示, 3D懸滴培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的h UC-MSCs均能形成軟骨細(xì)胞;但熒光實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示, 3D懸滴培養(yǎng)的h UC-MSCs形成軟骨細(xì)胞的成軟骨相關(guān)基因的表達(dá)明顯多于貼壁培養(yǎng)細(xì)胞形成軟骨細(xì)胞的成... 

【文章來源】：中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2019年10期 第1967-1975頁

【文章頁數(shù)】：9 頁

【圖文】：

第5代人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的表面標(biāo)記表達(dá)

hUC-MSCs細(xì)胞微球的形成和形態(tài)

3D懸滴培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的第5代hUC-MSCs28天成軟骨誘導(dǎo)后進(jìn)行II型膠原免疫組化染色分析:對(duì)照組細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜呈淡黃色,為弱陽性著色(圖4A和圖4D),成軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)組hUC-MSCs組細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜呈棕黃色,為強(qiáng)陽性著色(圖4B和圖4E);3D懸滴培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞隨機(jī)選取5個(gè)透明、非重疊樣本區(qū)域,用Image-Pro Plus分析系統(tǒng)對(duì)II型膠原免疫組化染色陽性結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果顯示,3D懸滴培養(yǎng)的誘導(dǎo)的第5代hUC-MSCs成軟骨能力更強(qiáng)(圖4C和圖4F)。兩組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。圖4 3D懸滴培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)hUC-MSCs誘導(dǎo)28天成軟骨II型膠原免疫組化染色結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]長期傳代培養(yǎng)對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[J]. 張權(quán),張亞奇,饒巍,周端鵬,韓兵,武棟成.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2019(01)
[2]人間充質(zhì)干細(xì)胞體外成軟骨分化能力綜合評(píng)價(jià)策略研究[J]. 張可華,劉靜,納濤,袁寶珠.  中國新藥雜志. 2017(18)



本文編號(hào)：2897603