研究背景:外泌體（exosomes）是由細胞內(nèi)的多囊泡體與細胞膜相融合,從而釋放到細胞外的雙層膜性納米小囊泡。exosomes能夠在細胞間傳遞生物活性物質(zhì),發(fā)揮重要的細胞間信息交流的作用。目前已有相關(guān)研究報道,原蟲可以分泌exosomes,且在宿主與寄生蟲間的信息交流方面發(fā)揮著重要作用。迄今,一些寄生蟲,如日本血吸蟲、布氏錐蟲、克氏錐蟲和新孢子蟲,均被證實可以分泌exosomes。弓形蟲是一種專性細胞內(nèi)寄生的機會性致病原蟲,具有生活史復雜且感染率高等特點,嚴重危害著人們的健康與畜牧業(yè)的發(fā)展。因此,探索有效預防或治療手段來抵抗弓形蟲感染刻不容緩。目前關(guān)于弓形蟲來源的exosomes的相關(guān)研究仍較為有限。研究目的:分離、純化和鑒定弓形蟲ME49蟲株來源的exosomes,并對弓形蟲exosomes中非編碼RNA進行分析,預測相關(guān)miRNA的宿主靶基因和靶定信號通路。進一步探究MAPK信號通路在弓形蟲exosomes對宿主免疫應答的調(diào)控機制中的作用。研究方法:首先利用差速離心、超濾濃縮以及試劑盒提取相結(jié)合的方法,對弓形蟲exosomes進行分離提取。并通過電子顯微鏡、納米粒徑分析儀（NTA）... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１弓形蟲生活史７??Ｆｉｇ．ｌ?Ｔｈｅ?ｌｉｆｅ?ｃｙｃｌｅ?ｏｆ?Ｔ．?ｇｏｎｄｉｉ??

應激活化蛋白激酶／ｃ－Ｊｕｎ氨基末端激酶（ＳＡＰＫ／ＪＮＫ）和ｐ３８ＭＡＰＫ，這類蛋白??激酶與細胞功能的許多改變具有一定功能相關(guān)性，包括細胞因子表達、增殖和凋??亡。ＪＮＫｓ和ｐ３８ＭＡＰＫｓ?（如圖３）作為應激活化蛋白激酶通路，在促炎性反應??及維持組織穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關(guān)鍵性作用。它們通過環(huán)境因素和遺傳因素來調(diào)控增殖、??分化以及細胞的存活４１。因此，作為免疫及促炎反應的活化調(diào)控關(guān)鍵因子，ＭＡＰＫｓ??在促炎性細胞因子的產(chǎn)生中具有重要調(diào)控作用４２。?＇??在我們前期的研究中，我們發(fā)現(xiàn)弓形蟲可以通過分泌ｅｘｏｓｏｍｅｓ調(diào)節(jié)宿主的??免疫應答４３。因此，在本研究中，我們將進一步在體外實驗中研究弓形蟲ｅｘｏｓｏｍｅｓ??對巨噬細胞ＲＡＷ２６４．７的作用。我們的研究結(jié)果表明，弓形蟲來源的ｅｘｏｓｏｍｅｓ??可通過激活ＪＮＫ信號通路引起固有免疫應答，從而為宿主－寄生蟲的信息交流提??供重要調(diào)節(jié)因子。??１１??

弓形蟲速殖子形態(tài)結(jié)構(gòu)顯微觀察??我們通過光學顯微鏡對弓形蟲ＭＥ４９蟲株速殖子進行形態(tài)觀察。結(jié)果如圖５??示，可見弓形蟲形態(tài)成經(jīng)典的月牙形，形態(tài)飽滿，有利于后期弓形蟲ｅｘｏｓｏｍｅｓ??提取。??


本文編號：2896442