發(fā)布時間：2020-11-14 02:53

　　 目的:明確Nischarin在腦老化時的表達變化,闡明nischarin的表達改變對樹突棘可塑性的影響,探討影響nischarin表達的可能機制。方法:利用Western blot技術分別檢測nischarin在不同年齡大鼠與小鼠的大腦皮層與海馬中表達的變化,以及體外不同發(fā)育程度的大鼠海馬神經元與小鼠海馬神經元中表達的變化。免疫熒光技術分別分析nischarin蛋白在不同年齡大鼠腦片中的蛋白表達與定位,以及在體外培養(yǎng)不同時間的大鼠海馬神經元中的表達與定位。構建能有效敲減nischarin的shRNA質粒;在原代培養(yǎng)海馬神經元中轉染shRNA質粒敲減nischarin蛋白后,觀察樹突棘密度及形態(tài)的變化。在原代培養(yǎng)神經元中分別孵育LPS、IL-1β與IL-6,利用western blot技術檢測nischarin蛋白的表達變化。結果:Nischarin的表達在大鼠與小鼠的大腦皮層及海馬中均隨年齡逐漸增加,在2年齡的大鼠中表達最高,其中在海馬的表達較16周齡的成年大鼠也有顯著增強。Nischarin在體外培養(yǎng)的大鼠與小鼠海馬神經元中的表達隨培養(yǎng)時間而增加,在培養(yǎng)20天的老化神經元中顯著高于13天的神經元。在腦片中nischarin熒光強度隨年齡增強,在原代海馬神經元中nischarin熒光強度隨發(fā)育增強。構建的Nischarin-shRNA質粒能有效地敲減nischarin蛋白的表達水平,經轉染原代培養(yǎng)海馬神經元后,發(fā)現(xiàn)椎體神經元的樹突棘密度顯著地高于對照shRNA組的神經元,且以瘦長型的樹突棘密度增加明顯,而蕈狀和短粗型樹突棘無明顯改變。LPS、IL-1β和IL-6分別孵育海馬神經元后,nischarin的表達較PBS對照組明顯增高,差異顯著。結論:Nischarin在老年鼠海馬中的表達顯著增強,抑制nischarin的表達能增加海馬椎體神經元樹突上的瘦長型樹突棘密度,LPS與一些細胞因子能促進nishcarin蛋白表達。推測Nischarin可能參與了腦老化時學習功能的衰退。
【學位單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R338
【部分圖文】：

ｎｉｓｃｈａｒｉｎ在大鼠大腦皮層與海馬中的表達在出生Ｂ（１?ｄａｙ）是最低的，且其表達??水平在發(fā)育階段（７?ｄａｙｓ，?３?ｗｅｅｋｓ，?１６?ｗｅｅｋｓ）隨年齡持續(xù)增長。年齡為２年的大鼠可??視為老年，圖３．１?Ｂ，老年大鼠（２?ｙｅａｒｓ）海馬中的ｎｉｓｃｈａｒｉｎ水平較成年同類有顯著??增長。說明ｎｉｓｃｈａｒｉｎ在腦老化時表迖增強。??Ａ??Ｉ?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ??ｗ??Ｅ?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ?４ＭＨ?ｍｍ??｜?丨Ｉ＂?＿丨曬?丨丨丨??Ｂ??３?５?＼ｃ＾ｙ／／Ａ?ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ?＃??＊?Ｉ?Ｉ?ｃｏｒｔｅｘ?＊??３．０?－?＂??Ｉ?２５：?■??ＩＩ?？?丨Ｔ?＿丄??ｏ．＾?１．５－?￣￣??運！?？?ＸｒＳ霧??ＴＯ?Ｓ?１．０－?Ｔ?Ｔ??１?－：?Ｔ?ｒ１！?Ｉ?Ｉ?ｉ??｜國?Ｉ??１?ｄａｙ?７?ｄａｙｓ?３?ｗｅｅｋｓ?１６?ｗｅｅｋｓ?２?ｙｅａｒｓ??１６??

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Ｆｉｇ．３．７．?Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ?ｓｐｉｎｅ?ｄｅｎｓｉｔｙ?ｉｎ?ｎｅｕｒｏｎｓ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｓｈＲＮＡ??Ａ．?ＧＦＰ?ｏｆ?ｎｅｕｒｏｎｓ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ－ｓｈＲＮＡ?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ－ｓｈＲＮＡ．?Ｂ．?Ｄｅｎｄｒｉｔｉｓｐｉｎｅｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｎｅｕｒｏｎ?ｉｎ?ｆｉｇｕｒｅ?Ａ．?Ｃ．?Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ?ｓｐｉｎｅ?ｄｅｎｓｉｔｙ?ｗａｓ?ｑｕａｎｔｉｆｉｅｄ?ｗｉｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｙｐｅｓ，?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｃｏｌｕｍｎ?ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｓ?ｔｈｅ?ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ?ｓｐｉｎｅ?ｄｅｎｓｉｔｙ?ｏｆ?ｔｈｉｎ?ｓｐｉｎｅ?ａｎｔｏｔａｌ?ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ?ｓｐｉｎｅ?ｄｅｎｓｉｔｙ?ａｒｅ?ｈｉｇｈｅｒ?ｉｎ?ｎｅｕｒｏｎｓ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ－ｓｈＲＮｔｈａｎ?ｗｉｔｈ?ｃｏｎｔｒｏｌ－ｓｈＲＮＡ．?Ｄａｔａ?ａｒｅ?ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ａｓ?ｍｅａｎ?ｗｉｔｈ?ＳＤ．?ｐ?＜?０．０１：?ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ－ｓｈＲＮＡ，?ｎ＝２０．??３．８?ＬＰＳ與細胞因子促進海馬神經元中ｎｉｓｃｈａｒｉｎ的表達??２５??
【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 Yue-min Ding;Yu-ying Li;Chu Wang;Hao Huang;Chen-chen Zheng;Shao-han Huang;Yang Xuan;Xiao-yi Sun;Xiong Zhang;;Nischarin-siRNA delivered by polyethyleniminealginate nanoparticles accelerates motor function recovery after spinal cord injury[J];Neural Regeneration Research;2017年10期

2 王彥永;耿媛;王培芝;王銘維;;常態(tài)腦老化認知功能障礙及相關代謝機制研究進展[J];醫(yī)學與哲學(B);2014年04期

本文編號：2882984