[目的]研究不同性別自發(fā)性乳腺癌小鼠乳腺腫瘤病毒啟動子(mouse mammary tumor virus, MMTV)控制下表達多瘤中間T抗原(polyoma middle T-antigen, Py MT)的轉基因小鼠的致瘤特性,再以雌性小鼠為觀察對象進一步研究血常規(guī)指標變化及肺轉移情況等。[方法]準備同為8周齡的Py MT雌性小鼠和Py MT雄性小鼠,觀察比較雌性與雄性小鼠腫瘤發(fā)病時間、生存時間與生存率;另取同為8周齡的雌性Py MT和雌性FVB小鼠,觀察8周后取血進行血常規(guī)檢測,并通過病理切片觀察小鼠12周齡及16周齡時肺組織的病理變化。[結果]每周觀測小鼠的形態(tài)學特征可發(fā)現(xiàn)雌鼠第8周可捫及腫瘤,而雄鼠則在第18周可捫及腫瘤;雌鼠最長生存時間是19周,雄鼠則為46周,即雌性小鼠腫瘤發(fā)病時間早于雄性小鼠,生存時間明顯短于雄性小鼠。血常規(guī)指標檢測顯示,雌性Py MT小鼠白細胞及亞群(除單核外)數(shù)量明顯高于FVB小鼠(P0.05,P0.001);雌性Py MT小鼠在12周齡開始出現(xiàn)肺轉移,肺部大量炎癥細胞浸潤,16周時肺組織伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)染色發(fā)現(xiàn)明顯的肺轉移,出現(xiàn)彌漫性分布、大小不等、質(zhì)實、染色深的癌巢,細胞間推擠或重疊,細胞大小形態(tài)不同。[結論] MMTV-PyMT自發(fā)性乳腺癌小鼠雌鼠發(fā)病比雄鼠早,生存時間短,具有實驗周期短、便于觀察腫瘤發(fā)生的優(yōu)勢,12周齡開始出現(xiàn)肺轉移,16周齡肺轉移明顯,是適合用于篩選抑制腫瘤細胞浸潤、轉移等藥物的乳腺癌動物模型。本實驗還通過血常規(guī)結果、肺轉移情況數(shù)據(jù)為實驗動物性別的選擇提供參考。
【部分圖文】：

∈螅???、3、4、5、6、7、8和10無條帶，為MMTV-PyMT陰性小鼠即FVB小鼠。2.2雌性與雄性鼠腫瘤生長趨勢比較如圖2B、2D中所示，乳腺癌MMTV-PyMT轉基因小鼠無論雌雄均會自發(fā)性出現(xiàn)腫瘤。雌性小鼠組在第8周出現(xiàn)可捫及的腫瘤，雄性組則在第18周出現(xiàn)可捫及的腫瘤，雌性小鼠出現(xiàn)腫瘤時間遠早于雄性小鼠，且雌性小鼠模型組腫瘤發(fā)展速度較雄性鼠快。隨著時間的推移，腫瘤的體積逐漸增大，數(shù)目增多。如圖2A、2C所示，兩組體重均呈現(xiàn)穩(wěn)定增長的趨勢。2.3雌性與雄性鼠生存率及生存時間比較如圖3注：M,markerNote:M,marker圖1MMTV-PyMT轉基因小鼠基因型鑒定圖Fig.1GenotypicidentificationofMMTV-PyMTmice500200100M12345678910圖2乳腺癌MMTV-PyMT小鼠腫瘤生長情況與體重變化Fig.2ChangesoftumorgrowthandbodyweightofMMTV-PyMTmice雌性體重Weight(g)AB50403020Volume(mm3)20000150001000050000雌性瘤體積8910111213141589101112131415WEEKSWEEKS雄性體重Weight(g)C45403530251820222426283032WEEKS1820222426283032WEEKSDVolume(mm3)1000080006000400020000雌性瘤體積1209

0軟件進行統(tǒng)計分析，兩樣本間采用t檢驗，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義，P<0.001表示差異具有高度統(tǒng)計學意義。2結果2.1MMTV-PyMT轉基因小鼠基因型鑒定圖經(jīng)聚合酶鏈式反應（polymerasechainreaction,PCR）擴增后，加入2μL6×loadingbuffer，混勻，上樣10μL于1.5%瓊脂糖凝膠上樣孔中，電泳30min后，結果如圖1中所示，MMTV-PyMT陽性小鼠基因檢測條帶為556bp，由此推斷樣本2、4和9均為MMTV-PyMT陽性小鼠，樣本1、3、4、5、6、7、8和10無條帶，為MMTV-PyMT陰性小鼠即FVB小鼠。2.2雌性與雄性鼠腫瘤生長趨勢比較如圖2B、2D中所示，乳腺癌MMTV-PyMT轉基因小鼠無論雌雄均會自發(fā)性出現(xiàn)腫瘤。雌性小鼠組在第8周出現(xiàn)可捫及的腫瘤，雄性組則在第18周出現(xiàn)可捫及的腫瘤，雌性小鼠出現(xiàn)腫瘤時間遠早于雄性小鼠，且雌性小鼠模型組腫瘤發(fā)展速度較雄性鼠快。隨著時間的推移，腫瘤的體積逐漸增大，數(shù)目增多。如圖2A、2C所示，兩組體重均呈現(xiàn)穩(wěn)定增長的趨勢。2.3雌性與雄性鼠生存率及生存時間比較如圖3注：M,markerNote:M,marker圖1MMTV-PyMT轉基因小鼠基因型鑒定圖Fig.1GenotypicidentificationofMMTV-PyMTmice500200100M12345678910圖2乳腺癌MMTV-PyMT小鼠腫瘤生長情況與體重變化Fig.2ChangesoftumorgrowthandbodyweightofMMTV-PyMTmice雌性體重Weight(g)AB50403020Volume(mm3)20000150001000050000雌性瘤體積8910111213141589101112131415WEEKSWEEKS雄性體重Weight(g)C45403530251820222426283032WEEKS1820222426283032WEEKSDVolume(mm3)1000080006000400020000雌性瘤體積1209

?啤?如圖6所示，肺HE染色結果顯示PyMT小鼠12周齡時肺泡結構部分被破壞，肺組織中大量炎癥細胞浸潤，氣管璧增厚，某些小鼠開始出現(xiàn)肺轉移。PyMT小鼠16周齡時肺組織出現(xiàn)嚴重的肺轉移，出現(xiàn)彌漫性分布，大小不等、質(zhì)實、染色深的癌巢，呈非典型增生，導管受壓變窄，細胞間推擠或重疊，細胞大小形態(tài)不同，偶爾可見核分裂現(xiàn)象；腫瘤細胞排列紊亂，失去正常的結構和層次，胞核增大，核分裂增多。3討論在小鼠乳腺癌病毒（mousemammarytumorvirus,郎佳麗，等：不同性別PyMT自發(fā)性乳腺癌小鼠成瘤特點和不同時間肺轉移觀察圖3雌性與雄性鼠生存時間比較Fig.3Comparisonofsurvivaltimebetweenfemaleandmalemice雌性生存曲線100806040200SurvivalRtae(%)A151617181920WEEKS雄性生存曲線100806040200SurvivalRtae(%)B3840424446WEEKS注：與FVB小鼠比較，*P<0.05，***P<0.001Note:ComparedwiththeFVBmice，*P<0.05，***P<0.001圖4雌性MMTV-PyMT與FVB小鼠血常規(guī)指標比較Fig.4ComparisonofbloodroutineindexesbetweenMMTV-PyMTandFVBoffemalemiceWBC2520151050A10∧9/LNEUT20151050B10∧9/LLYMPH86420C10∧9/LMONO0.250.200.150.100.050.00D10∧9/LEOS0.40.30.20.10.0E10∧9/LBASO0.080.060.040.020.00F10∧9/LLUC1.00.80.60.40.20.0F10∧9/LFVBPYTM1210
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本文編號：2874231