發(fā)布時(shí)間：2020-10-31 02:10

　　 目的:探討人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)是否具有MSCs的特性及經(jīng)誘導(dǎo)后在體外能否向韌帶細(xì)胞分化。方法:取產(chǎn)婦胎盤通過(guò)酶消化法獲得h AMSCs,流式細(xì)胞術(shù)鑒定h AMSCs表型特征。取第3代h AMSCs分別加入含不同誘導(dǎo)液的LG-DMEM/F12培養(yǎng)基:A組TGF-β1+b FGF,B組透明質(zhì)酸(hyaluronan,HA),C組TGF-β1+b FGF+HA,D組為空白對(duì)照組。倒置顯微鏡觀察誘導(dǎo)后21 d各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;磺酰羅丹明B(sulforhodamine B,SRB)比色法檢測(cè)各組細(xì)胞生長(zhǎng)活性;誘導(dǎo)后7、14、21 d分別采用免疫組織化學(xué)染色及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)韌帶特異性蛋白和基因表達(dá)。結(jié)果:流式細(xì)胞術(shù)鑒定結(jié)果表明h AMSCs表達(dá)MSCs表型。倒置相差顯微鏡觀察示誘導(dǎo)21 d A、B、C組細(xì)胞均呈長(zhǎng)梭形纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng),C組細(xì)胞形態(tài)更單一、有明顯方向性且較A組排列更緊湊。SRB比色法檢測(cè)示各組細(xì)胞于培養(yǎng)6 d左右達(dá)增殖高峰,6d時(shí)A、B、C組細(xì)胞活性均顯著高于D組。免疫組織化學(xué)結(jié)果示:誘導(dǎo)培養(yǎng)7 d,各組均未檢測(cè)到TNC表達(dá);7、14、21 d A、B、C組Ⅰ型膠原表達(dá)均顯著高于D組,14、21 d A、B、C組Ⅲ型膠原表達(dá)顯著高于D組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。B組Ⅰ型膠原表達(dá)以及A、C組Ⅲ型膠原、TNC表達(dá)隨時(shí)間增加均呈逐漸增高趨勢(shì),各時(shí)間點(diǎn)間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果示:誘導(dǎo)培養(yǎng)21 d,C組Ⅰ型膠原、TNC m RNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于A、B組,B組Ⅲ型膠原m RNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于A、C組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。A、C組Ⅰ型膠原、TNC以及C組Ⅲ型膠原m RNA相對(duì)表達(dá)量隨時(shí)間增加呈逐漸上調(diào)趨勢(shì),各時(shí)間點(diǎn)間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。結(jié)論:h AMSCs具有MSCs的特性,有良好增殖能力,經(jīng)體外誘導(dǎo)后韌帶特異性基因表達(dá)上調(diào),韌帶特異性蛋白合成增加,可作為韌帶組織工程種子細(xì)胞來(lái)源之一。
【學(xué)位單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：R686.5
【文章目錄】：
中英文縮略詞表
中文摘要
英文摘要
前言
材料與方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 羊膜間充質(zhì)干細(xì)在再生醫(yī)學(xué)的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介

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本文編號(hào)：2863309