目的:mTOR(mechanistic target of Rapamycin)是一類(lèi)在真核生物中高度保守的非典型絲氨酸/蘇氨酸激酶,細(xì)胞內(nèi)主要存在mTORC1和mTORC2兩種復(fù)合體。mTOR參與眾多細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程。在低等生物酵母細(xì)胞中,mTOR具有調(diào)控細(xì)胞骨架的功能,但在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中它是否能夠調(diào)控細(xì)胞骨架一直存在爭(zhēng)議。本課題旨在探討mTORC1對(duì)細(xì)胞骨架之一的微管系統(tǒng)(microtubule)的穩(wěn)定性的影響以及雷帕霉素(Rapamycin)與微管靶點(diǎn)化療藥物聯(lián)用對(duì)微管系統(tǒng)的調(diào)控。方法:1.采用免疫熒光技術(shù),觀察雷帕霉素預(yù)處理組和未處理組細(xì)胞對(duì)微管解聚藥物諾考達(dá)唑的抵抗能力,從而評(píng)估微管的穩(wěn)定性。2.采用蛋白免疫印跡技術(shù),檢測(cè)經(jīng)雷帕霉素處理后,微管靶點(diǎn)化療藥物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的能力。3.采用shRNA技術(shù)和Crispr-Cas9技術(shù)構(gòu)建ATG5缺陷細(xì)胞系。4.采用免疫熒光技術(shù),觀察ATG5正常組和缺陷組細(xì)胞對(duì)諾考達(dá)唑的抵抗能力。5.采用蛋白免疫印跡技術(shù),檢測(cè)mTORC1不同活化程度下,Stathmin、KIF2A、CLIP-170等微管相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果:1.在雷帕霉素預(yù)處理過(guò)的HeLa細(xì)胞中,諾考達(dá)唑解聚微管的能力相比于對(duì)照組明顯降低。2.使用雷帕霉素穩(wěn)定微管后,紫杉醇與諾考達(dá)唑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡能力降低,而對(duì)照組依托泊苷誘導(dǎo)腫瘤凋亡能力并沒(méi)有降低。3.在ATG5敲低和敲除的細(xì)胞中,諾考達(dá)唑解聚細(xì)胞微管結(jié)構(gòu)的能力與對(duì)照組相比并無(wú)太大差異。結(jié)論:1.雷帕霉素能夠增強(qiáng)微管的穩(wěn)定性,mTORC1負(fù)性調(diào)控微管穩(wěn)定性。2.雷帕霉素穩(wěn)定微管可以抑制微管靶向化療藥物的腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。3.雷帕霉素穩(wěn)定微管的能力與細(xì)胞自噬無(wú)關(guān)。細(xì)胞自噬的發(fā)生需要穩(wěn)定的微管,但是微管的穩(wěn)定不需要細(xì)胞自噬的參與。
【學(xué)位單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R363
【部分圖文】：

mTORC1和mTORC2的組成

圖 1.2 mTOR 信號(hào)通路[29]Figure1.2 mTOR signaling pathway..1.2 mTOR 通路與腫瘤近年來(lái)的研究表明，mTOR 在腫瘤疾病的發(fā)生和進(jìn)展中扮演著重要的作用瘤細(xì)胞中比較重要的細(xì)胞活動(dòng)，如轉(zhuǎn)移、增殖、分化都受到 mTOR 通路的調(diào)節(jié)大量的腫瘤中都已檢測(cè)到 mTOR 的高度活化，如胰腺癌[30]、胃癌[31]、乳腺癌[32巢癌[33]等。在許多細(xì)胞系的體外實(shí)驗(yàn)和老鼠模型的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，致癌基因的活化或者抑癌基因的丟失促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)、血管生成和轉(zhuǎn)移[34]。眾多研究，mTORC1 的高度活化縮短了細(xì)胞周期，加速了 G1/S 期的進(jìn)展，使得腫瘤細(xì)殖能力增強(qiáng)[35]；高度活化的 mTORC1 可以活化低氧誘導(dǎo)因子α(HIF-α)，促進(jìn)管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，導(dǎo)致新生血管形成為腫瘤增加額外

ton）是一種細(xì)胞的重要的機(jī)械核生物的細(xì)胞中，細(xì)胞骨架主由微絲（micro filaments）、微）組成，這三種蛋白質(zhì)纖維擁扮演著不同的角色[54]。另一種55, 56],這種蛋白質(zhì)能夠連接細(xì)胞還能將細(xì)胞的化學(xué)能轉(zhuǎn)化為機(jī)的三種骨架蛋白之一，分布于胞骨架蛋白中，微管的形態(tài)結(jié)
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本文編號(hào)：2851379