本文關鍵詞：鞘胺醇-1-磷酸（S1P）及其受體對人臍帶間充質干細胞生存的影晌，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：干細胞(stem cell)是一類未分化的具有自我復制功能和多向分化潛能的原始細胞,在一定條件下可分化為多種功能細胞和組織器官。間充質干細胞(mesenchymal stem cell, MSCs)作為成體干細胞的典型代表和重要成員,首先從骨髓中分離得到骨髓間充質干細胞。骨髓來源的細胞隨著供體年齡的增長,細胞數(shù)量減少、增殖能力也下降。人臍帶間充質干細胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUC-MSCs)是一類從臍帶膠質中分離出的具有多潛能的成體干細胞,因其來源廣泛、易于分離、低免疫原性、無倫理爭議等優(yōu)點逐漸代替骨髓間充質干細胞,成為近年來廣泛研究的種子細胞。鞘胺醇-1-磷酸(S1P)是鞘胺醇在鞘胺醇激酶作用下產生的磷脂信號分子。S1P通過結合5種G蛋白偶聯(lián)受體(S1PR1-5)激活下游的一系列信號途徑,調節(jié)細胞的增殖、遷移、凋亡等多種生物功能。我們前期研究結果證實,S1P能促進hU-MSCs的增殖并且不引起細胞分化。這對干細胞移植治療中出現(xiàn)的種子細胞生長緩慢,存活率低等現(xiàn)象具有良好的應用前景。此外,S1P作為磷脂小分子,無免疫原性及異體排斥作用,對開發(fā)無血清培養(yǎng)基有潛在的應用價值。本文旨在探討鞘胺醇-1-磷酸及其受體對人臍帶間充質干細胞生存的影響。首先用排瓶法分離培養(yǎng)hU-MSCs,結合細胞形態(tài)和細胞表面標記物的檢測來鑒定hU-MSCs。Real time PCR法檢測hU-MSCs中5種S1P受體的表達譜,發(fā)現(xiàn)S1PR2優(yōu)先農達。MTT法檢測S1P對hU-MSCs的增殖作用,發(fā)現(xiàn)S1P能促進細胞增殖。Micro chemotoxic chamber法檢測不同濃度S1P對hU-MSCs的遷移作用,發(fā)現(xiàn)S1P能抑制hU-MSCs遷移并呈劑量依賴關系。最后用S1PR2拮抗劑JTE-013進一步探討S1P通過S1PR2抗hU-MSCs的凋亡并促進細胞生存。
【關鍵詞】：人臍帶間充質干細胞(hU-MSCs) 鞘胺醇-1-磷酸受體2(S1PR2) 凋亡 增殖 遷移
【學位授予單位】：內蒙古大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 英文縮略表10-11
• 前言11-13
• 1 實驗材料13-16
• 1.1 主要試劑13-14
• 1.2 實驗器材14
• 1.3 常用溶液的配制14-16
• 2 實驗方法16-28
• 2.1 人臍帶間充質干細胞的分離和培養(yǎng)16-18
• 2.1.1 hU-MSCs的分離16
• 2.1.2 hU-MSCs的傳代16-17
• 2.1.3 hU-MSCs的凍存17-18
• 2.1.4 hU-MSCs的復蘇18
• 2.2 人臍帶間充質干細胞生物學特性鑒定18-19
• 2.2.1 hU-MSCs形態(tài)學觀察18
• 2.2.2 hU-MSCs標準曲線的制作18-19
• 2.2.3 hU-MSCs生長曲線的制作19
• 2.2.4 流式細胞儀檢測hU-MSCs的細胞表面標記物19
• 2.3 人臍帶間充質干細胞中檢測S1P受體mRNA的表達譜19-24
• 2.3.1 培養(yǎng)hU-MSCs提取細胞總RNA19-20
• 2.3.2 去除總RNA中的基因組DNA20
• 2.3.3 獲得hU-MSCs的cDNA模板20-21
• 2.3.4 Real Time PCR檢測正常條件下hU-MSCs中S1PRs的mRNA表達譜21-23
• 2.3.5 Real Time PCR檢測S1P刺激后hU-MSCs中S1PRs的mRNA表達譜23-24
• 2.4 S1P對人臍帶間充質干細胞生物功能的影響24-27
• 2.4.1 MTT法檢測S1P對hU-MSCs的增殖作用24
• 2.4.2 Micro chemotoxic chamber法檢測S1P對hU-MSCs遷移功能的影響24-25
• 2.4.3 MTT法檢測脂多糖(LPS)對hU-MSCs的誘導凋亡作用25-26
• 2.4.4 S1P對脂多糖(LPS)誘導的hU-MSCs有抗凋亡作用26-27
• 2.4.5 檢測S1PR2拮抗劑(JTE-013)對hU-MSCs抗凋亡的作用27
• 2.5 統(tǒng)計學處理27-28
• 3 實驗結果與分析28-39
• 3.1 人臍帶間充質干細胞的分離與鑒定28-32
• 3.1.1 hU-MSCs形態(tài)學觀察28-30
• 3.1.2 hU-MSCs標準曲線的繪制30
• 3.1.3 hU-MSCs生長曲線的繪制30-31
• 3.1.4 hU-MSCs表面標記物的檢測31-32
• 3.2 人臍帶間充質干細胞中S1P受體的mRNA表達譜32-34
• 3.2.1 正常條件下hU-MSCs中5種S1PRs的mRNA表達量32-33
• 3.2.2 S1P刺激后hU-MSCs中5種S1PRs的mRNA表達量33-34
• 3.3 S1P對人臍帶間充質干細胞生物功能的影響34-39
• 3.3.1 S1P促進hU-MSCs的增殖34
• 3.3.2 S1P抑制hU-MSCs的遷移34-36
• 3.3.3 脂多糖(LPS)誘導hU-MSCs的凋亡36-37
• 3.3.4 S1P抑制LPS誘導的hU-MSCs凋亡作用37-38
• 3.3.5 S1PR2拮抗劑抑制S1P誘導的hU-MSCs增殖作用38-39
• 4 討論39-41
• 5 結論41-42
• 文獻綜述42-47
• 參考文獻47-50
• 致謝50

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據庫 前1條

1 陳淑華;閭宏偉;;S1P及其受體在心血管系統(tǒng)中的作用[J];中國老年學雜志;2013年17期

中國碩士學位論文全文數(shù)據庫 前1條

1 那仁格日勒;溶血磷脂酸抑制人臍帶間充質干細胞凋亡及其分子機理[D];內蒙古大學;2013年

  本文關鍵詞：鞘胺醇-1-磷酸（S1P）及其受體對人臍帶間充質干細胞生存的影晌，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：279243