本文關(guān)鍵詞：鞘胺醇-1-磷酸（S1P）及其受體對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生存的影晌，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：干細(xì)胞(stem cell)是一類未分化的具有自我復(fù)制功能和多向分化潛能的原始細(xì)胞,在一定條件下可分化為多種功能細(xì)胞和組織器官。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell, MSCs)作為成體干細(xì)胞的典型代表和重要成員,首先從骨髓中分離得到骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。骨髓來源的細(xì)胞隨著供體年齡的增長,細(xì)胞數(shù)量減少、增殖能力也下降。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUC-MSCs)是一類從臍帶膠質(zhì)中分離出的具有多潛能的成體干細(xì)胞,因其來源廣泛、易于分離、低免疫原性、無倫理爭議等優(yōu)點(diǎn)逐漸代替骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,成為近年來廣泛研究的種子細(xì)胞。鞘胺醇-1-磷酸(S1P)是鞘胺醇在鞘胺醇激酶作用下產(chǎn)生的磷脂信號分子。S1P通過結(jié)合5種G蛋白偶聯(lián)受體(S1PR1-5)激活下游的一系列信號途徑,調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、遷移、凋亡等多種生物功能。我們前期研究結(jié)果證實(shí),S1P能促進(jìn)hU-MSCs的增殖并且不引起細(xì)胞分化。這對干細(xì)胞移植治療中出現(xiàn)的種子細(xì)胞生長緩慢,存活率低等現(xiàn)象具有良好的應(yīng)用前景。此外,S1P作為磷脂小分子,無免疫原性及異體排斥作用,對開發(fā)無血清培養(yǎng)基有潛在的應(yīng)用價(jià)值。本文旨在探討鞘胺醇-1-磷酸及其受體對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生存的影響。首先用排瓶法分離培養(yǎng)hU-MSCs,結(jié)合細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞表面標(biāo)記物的檢測來鑒定hU-MSCs。Real time PCR法檢測hU-MSCs中5種S1P受體的表達(dá)譜,發(fā)現(xiàn)S1PR2優(yōu)先農(nóng)達(dá)。MTT法檢測S1P對hU-MSCs的增殖作用,發(fā)現(xiàn)S1P能促進(jìn)細(xì)胞增殖。Micro chemotoxic chamber法檢測不同濃度S1P對hU-MSCs的遷移作用,發(fā)現(xiàn)S1P能抑制hU-MSCs遷移并呈劑量依賴關(guān)系。最后用S1PR2拮抗劑JTE-013進(jìn)一步探討S1P通過S1PR2抗hU-MSCs的凋亡并促進(jìn)細(xì)胞生存。
【關(guān)鍵詞】：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hU-MSCs) 鞘胺醇-1-磷酸受體2(S1PR2) 凋亡 增殖 遷移
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 英文縮略表10-11
• 前言11-13
• 1 實(shí)驗(yàn)材料13-16
• 1.1 主要試劑13-14
• 1.2 實(shí)驗(yàn)器材14
• 1.3 常用溶液的配制14-16
• 2 實(shí)驗(yàn)方法16-28
• 2.1 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離和培養(yǎng)16-18
• 2.1.1 hU-MSCs的分離16
• 2.1.2 hU-MSCs的傳代16-17
• 2.1.3 hU-MSCs的凍存17-18
• 2.1.4 hU-MSCs的復(fù)蘇18
• 2.2 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性鑒定18-19
• 2.2.1 hU-MSCs形態(tài)學(xué)觀察18
• 2.2.2 hU-MSCs標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作18-19
• 2.2.3 hU-MSCs生長曲線的制作19
• 2.2.4 流式細(xì)胞儀檢測hU-MSCs的細(xì)胞表面標(biāo)記物19
• 2.3 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞中檢測S1P受體mRNA的表達(dá)譜19-24
• 2.3.1 培養(yǎng)hU-MSCs提取細(xì)胞總RNA19-20
• 2.3.2 去除總RNA中的基因組DNA20
• 2.3.3 獲得hU-MSCs的cDNA模板20-21
• 2.3.4 Real Time PCR檢測正常條件下hU-MSCs中S1PRs的mRNA表達(dá)譜21-23
• 2.3.5 Real Time PCR檢測S1P刺激后hU-MSCs中S1PRs的mRNA表達(dá)譜23-24
• 2.4 S1P對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物功能的影響24-27
• 2.4.1 MTT法檢測S1P對hU-MSCs的增殖作用24
• 2.4.2 Micro chemotoxic chamber法檢測S1P對hU-MSCs遷移功能的影響24-25
• 2.4.3 MTT法檢測脂多糖(LPS)對hU-MSCs的誘導(dǎo)凋亡作用25-26
• 2.4.4 S1P對脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的hU-MSCs有抗凋亡作用26-27
• 2.4.5 檢測S1PR2拮抗劑(JTE-013)對hU-MSCs抗凋亡的作用27
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理27-28
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析28-39
• 3.1 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離與鑒定28-32
• 3.1.1 hU-MSCs形態(tài)學(xué)觀察28-30
• 3.1.2 hU-MSCs標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制30
• 3.1.3 hU-MSCs生長曲線的繪制30-31
• 3.1.4 hU-MSCs表面標(biāo)記物的檢測31-32
• 3.2 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞中S1P受體的mRNA表達(dá)譜32-34
• 3.2.1 正常條件下hU-MSCs中5種S1PRs的mRNA表達(dá)量32-33
• 3.2.2 S1P刺激后hU-MSCs中5種S1PRs的mRNA表達(dá)量33-34
• 3.3 S1P對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物功能的影響34-39
• 3.3.1 S1P促進(jìn)hU-MSCs的增殖34
• 3.3.2 S1P抑制hU-MSCs的遷移34-36
• 3.3.3 脂多糖(LPS)誘導(dǎo)hU-MSCs的凋亡36-37
• 3.3.4 S1P抑制LPS誘導(dǎo)的hU-MSCs凋亡作用37-38
• 3.3.5 S1PR2拮抗劑抑制S1P誘導(dǎo)的hU-MSCs增殖作用38-39
• 4 討論39-41
• 5 結(jié)論41-42
• 文獻(xiàn)綜述42-47
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 致謝50

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳淑華;閭宏偉;;S1P及其受體在心血管系統(tǒng)中的作用[J];中國老年學(xué)雜志;2013年17期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 那仁格日勒;溶血磷脂酸抑制人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)理[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：鞘胺醇-1-磷酸（S1P）及其受體對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生存的影晌，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：279243