雙TOR抑制劑AZD2014對體外細(xì)粒棘球絳蟲原頭蚴活性影響的研究
發(fā)布時間：2020-07-31 18:31
【摘要】：目的:由于AZD2014是TOR蛋白激酶的抑制劑,因此通過觀察不同濃度AZD2014在體外培養(yǎng)的細(xì)粒棘球蚴原頭蚴的活性,從而得到AZD2014作用于原頭蚴的相對最適濃度,進(jìn)一步驗證了原頭蚴體內(nèi)存在TOR蛋白激酶;并通過阻斷原頭蚴體內(nèi)的TOR蛋白激酶活性,從而阻斷PI3K-AKT-TOR細(xì)胞信號通路,進(jìn)而殺滅囊泡內(nèi)的原頭蚴,為靶向藥物治療包蟲病提供理論和研究基礎(chǔ)。方法:1.不同濃度的AZD2014在體外培養(yǎng)細(xì)粒棘球蚴原頭蚴,通過0.1%的伊-紅染色后觀察原頭蚴的存活率,并連續(xù)觀察15天同時統(tǒng)計其存活率;2.不同濃度AZD2014體外培養(yǎng)原頭蚴4天后,取其蛋白上清液,用Western-blot驗證TOR下游蛋白因子的表達(dá)情況,用ELISI試劑盒檢測Caspase-3酶活性的表達(dá);3、用100μM的AZD2014培養(yǎng)原頭蚴1天,4天,7天后,取其蛋白上清液,用Western-blot驗證TOR下游蛋白因子的表達(dá)情況,用ELISI試劑盒檢測Caspase-3酶活性的表達(dá)。結(jié)果:1、隨AZD2014培養(yǎng)濃度的增大而原頭蚴的存活率逐漸下降,隨AZD2014培養(yǎng)時間的延長而原頭蚴的存活率逐漸下降;2、Western-blot驗證TOR蛋白下游蛋白因子p-AKT,p-S6K1,p-4EBP1的表達(dá)量隨AZD2014濃度的增大而下降,且隨AZD2014培養(yǎng)時間的延長而下降(P㩳0.05);3、ELISI驗證Caspase-3的活性隨AZD2014培養(yǎng)濃度的增大而升高,且隨AZD2014培養(yǎng)時間的延長而升高(P㩳0.05)。結(jié)論:1、AZD2014通過抑制原頭蚴體內(nèi)的TOR蛋白而具有殺滅原頭蚴的作用;2、AZD2014殺滅體外培養(yǎng)的細(xì)粒棘球蚴原頭蚴具有時間和濃度的依賴性。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R383.33
【圖文】：
17光學(xué)顯微鏡觀察不同濃度 AZD2014 作用下細(xì)粒棘球蚴原頭蚴的形態(tài)學(xué)變化。（A）BDMSO 組;（C）25uM 組;（D）50uM 組;（E-G）100uM 組;（H）200uM 組；（A-D， 天的原頭蚴;（E）培養(yǎng) 1 天的原頭蚴;（F）培養(yǎng)了 7 天的原頭蚴。注：圖中箭頭所指該頭節(jié)活性弱或者已死亡。he morphological changes of E.granulosus protoscoleces which cultured in different conceD2014 by using optical microscopy.(A)cultured protoscoleces in Blank group;(Boleces in DMSO group;(C)cultured protoscoleces in 25uM group;(D)cultured protoscgroup;(E-G)cultured protoscoleces in 100uM group;(H)cultured protoscoleces inA-D,F,H )keeped protoscoleces for 4 days;(E)keeped protoscoleces for 1 day;(oleces for 7 days。Note: Those protoscoleces which are indicated by the arrow in the figury are weak or dead.
圖 2.AZD2014 在體外作用于原頭蚴后，用 0.1%的伊-紅通過對原頭蚴的染色來檢測原頭蚴的存活率。通過觀察發(fā)現(xiàn)原頭蚴存活率對 AZD2014 具有作用濃度和時間依賴性。Fig.2. The survival rate of E.granulosus protoscoleces which were cultured by AZD2014 in vivro anddetected by using 0.1% eosin staining.Results dependented on the culure time and- dose of CDCA.
19如圖 3. 不同濃度的 AZD2014 培養(yǎng)原頭蚴 4 天后 Western-blot 檢測其蛋白因子的表達(dá)情況。（A）p-AKT1，p-4EBP1 和 p-S6K1 為檢測的目的蛋白因子，GPDH 為內(nèi)部參照。（B-D）p-AKT1，p-4EBP1和 p-S6K1 在不同組別中的表達(dá)。結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。采用單因素方差分析（ANOVA）。P <0.05 時差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（*P <0.05，** P <0.01）。Fig.3. Western blot analysised the protein samples of E.granulosus protoscoleces which were cultured bydifferent doses of AZD2014 for 4days respectively in vivro. (A)p-AKT1, p-4EBP1 and p-S6K1 were thedetected purpose. GPDH was used as loading control. (B-D)The expression of p-AKT1, p-4EBP1 andp-S6K1 in different groups. All the results were presented as the mean±SD(standard deviation). In thefigurs, the differences of statistically significance were detected by one-way analysis of variance (ANOVA).P-values <0.05 was authenticated statistically significant(*P < 0.05, **P < 0.01)。
本文編號：2776842
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R383.33
【圖文】：
17光學(xué)顯微鏡觀察不同濃度 AZD2014 作用下細(xì)粒棘球蚴原頭蚴的形態(tài)學(xué)變化。（A）BDMSO 組;（C）25uM 組;（D）50uM 組;（E-G）100uM 組;（H）200uM 組；（A-D， 天的原頭蚴;（E）培養(yǎng) 1 天的原頭蚴;（F）培養(yǎng)了 7 天的原頭蚴。注：圖中箭頭所指該頭節(jié)活性弱或者已死亡。he morphological changes of E.granulosus protoscoleces which cultured in different conceD2014 by using optical microscopy.(A)cultured protoscoleces in Blank group;(Boleces in DMSO group;(C)cultured protoscoleces in 25uM group;(D)cultured protoscgroup;(E-G)cultured protoscoleces in 100uM group;(H)cultured protoscoleces inA-D,F,H )keeped protoscoleces for 4 days;(E)keeped protoscoleces for 1 day;(oleces for 7 days。Note: Those protoscoleces which are indicated by the arrow in the figury are weak or dead.
圖 2.AZD2014 在體外作用于原頭蚴后，用 0.1%的伊-紅通過對原頭蚴的染色來檢測原頭蚴的存活率。通過觀察發(fā)現(xiàn)原頭蚴存活率對 AZD2014 具有作用濃度和時間依賴性。Fig.2. The survival rate of E.granulosus protoscoleces which were cultured by AZD2014 in vivro anddetected by using 0.1% eosin staining.Results dependented on the culure time and- dose of CDCA.
19如圖 3. 不同濃度的 AZD2014 培養(yǎng)原頭蚴 4 天后 Western-blot 檢測其蛋白因子的表達(dá)情況。（A）p-AKT1，p-4EBP1 和 p-S6K1 為檢測的目的蛋白因子，GPDH 為內(nèi)部參照。（B-D）p-AKT1，p-4EBP1和 p-S6K1 在不同組別中的表達(dá)。結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。采用單因素方差分析（ANOVA）。P <0.05 時差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（*P <0.05，** P <0.01）。Fig.3. Western blot analysised the protein samples of E.granulosus protoscoleces which were cultured bydifferent doses of AZD2014 for 4days respectively in vivro. (A)p-AKT1, p-4EBP1 and p-S6K1 were thedetected purpose. GPDH was used as loading control. (B-D)The expression of p-AKT1, p-4EBP1 andp-S6K1 in different groups. All the results were presented as the mean±SD(standard deviation). In thefigurs, the differences of statistically significance were detected by one-way analysis of variance (ANOVA).P-values <0.05 was authenticated statistically significant(*P < 0.05, **P < 0.01)。
【參考文獻(xiàn)】
相關(guān)期刊論文 前1條
1 ;Up-regulation of PIK3CA promotes metastasis in gastric carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2010年39期
本文編號：2776842
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