【摘要】：目的:相間盤退變?yōu)槎喾N因素綜合影響所致,有報(bào)道表明,軟骨終板發(fā)生鈣化所引發(fā)椎間盤營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)下降為椎間盤啟動(dòng)的關(guān)鍵性因素。本實(shí)驗(yàn)通過培養(yǎng)大鼠椎體終板軟骨細(xì)胞,檢測ADAMTS-5蛋白的表達(dá)水平與IL-1β是否具有相關(guān)性,在IL-1β炎性因子的干預(yù)下,通過檢測磷酸化p65蛋白,p65蛋白含量的變化,來探究IL-1β是否促進(jìn)ADAMTS-5的表達(dá)通過NF-κB信號(hào)通路,從而促進(jìn)終板軟骨細(xì)胞退變,為預(yù)防和治療椎間盤退變提供新的方法。方法:取4-6周齡大鼠椎體的終板軟骨細(xì)胞進(jìn)行純化,通過原代及傳代培養(yǎng)。選擇生長較好的3代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),通過觀察細(xì)胞的形態(tài),來描繪細(xì)胞的生長曲線。1.采用MTT法研究不同濃度的IL-1β對大鼠終板軟骨細(xì)胞增殖的影響。通過在紫外分光光度計(jì)上測定各孔光吸收值,以時(shí)間為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo),觀察細(xì)胞增殖變化。2.研究不同濃度的IL-1β(5 ng/ml,10 ng/ml、20 ng/ml、40 ng/ml)對大鼠終板軟骨細(xì)胞ADAMTS-5蛋白表達(dá)的影響。3.培養(yǎng)皿中加入10 ng/mL的IL-1β,觀察24、48、96小時(shí),大鼠椎板軟骨細(xì)胞中ADAMTS-5蛋白表達(dá)量的變化。4.培養(yǎng)皿中加入10 ng/mL的IL-1β,設(shè)立空白對照,通過檢測磷酸化p65蛋白含量,p65蛋白含量的變化,來探究IL-1β是否通過激活NF-κB信號(hào)通路促進(jìn)ADAMTS-5的表達(dá)。5.將大鼠椎體終板軟骨細(xì)胞分為4組,第一組為空白對照組,第二組加入10 ng/mL的IL-1β,第三組加入50 ug/ml NF-κB信號(hào)通路的阻斷劑SN50,第四組加入10 ng/mL的IL-1β及50 ug/ml SN50,觀察ADAMTS-5蛋白表達(dá)量的變化,從而驗(yàn)證IL-1β是否通過激活NF-κB信號(hào)通路促進(jìn)ADAMTS-5的表達(dá)。結(jié)果:1.隨IL-1β濃度增高,大鼠終板軟骨細(xì)胞數(shù)目逐漸減少,且各組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.不同濃度的IL-1β對大鼠終板軟骨細(xì)胞ADAMTS-5蛋白表達(dá)與空白對照組相比都有增強(qiáng),且各組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。10 ng/ml的IL-1β作用最強(qiáng)。3.不同時(shí)間點(diǎn),10 ng/ml的IL-1β對大鼠終板軟骨細(xì)胞ADAMTS-5蛋白表達(dá)與空白對照組相比都有增強(qiáng),且各組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),48小時(shí)達(dá)到高峰。4.與空白對比,10 ng/ml IL-1β作用大鼠終板軟骨細(xì)胞48小時(shí)后,p-p65蛋白濃度明顯升高,而p65蛋白濃度基本保持不變。兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.四組不同干預(yù)蛋白分別作用于大鼠終板軟骨細(xì)胞,其ADAMTS-5蛋白表達(dá)量從高到低分別為IL-1β組,IL-1β+SN50組,空白對照組,SN50組。且各組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.IL-1β能夠抑制大鼠終板軟骨細(xì)胞的增殖。2.IL-1β對大鼠終板軟骨細(xì)胞增殖的抑制可能是部分通過影響NF-κB信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R363
【圖文】：

細(xì)胞培養(yǎng)（貼壁，細(xì)胞成梭形，多角形）

大鼠終板軟骨細(xì)胞的甲苯胺藍(lán)染色(100×)

圖 3 大鼠終板軟骨細(xì)胞的生長曲線owth curve of the rat endplate chondrocytes (the inoculation days, the ordinate is the OD value ultraviolet spectrophotometer )

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