【摘要】：條件致病真菌白念珠菌既是良性腸道共生體又是致命的全身性病原體。當(dāng)宿主的免疫系統(tǒng)受損時(shí),白念珠菌就會(huì)感染宿主細(xì)胞,引起炎癥。在釀酒酵母中,Ysy6蛋白可以抑制大腸桿菌中secY突變體的分泌缺陷,其哺乳動(dòng)物同源物是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力相關(guān)蛋白1(SERP1),也稱為核糖體相關(guān)膜蛋白4(RAMP4),是一種Sec61相關(guān)多肽,可以通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力誘導(dǎo)其表達(dá)。但是在白念珠菌中,該蛋白的功能尚未明確。此外,Atg8是自噬過(guò)程中自噬體形成的關(guān)鍵蛋白,該蛋白同樣可以被內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力誘導(dǎo)。本研究主要對(duì)白念珠菌Ysy6蛋白進(jìn)行鑒定,同時(shí)對(duì)Ysy6和Atg8的功能進(jìn)行研究。主要結(jié)果如下:(1)通過(guò)BLASTP方法分析,在白念珠菌基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中鑒定了白念珠菌中釀酒酵母Ysy6蛋白的同源蛋白,其同源性為50.8%。通過(guò)GFP定位發(fā)現(xiàn)Ysy6定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和液泡上,提示該蛋白可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能緊密相連。(2)利用PCR介導(dǎo)的同源重組方法,構(gòu)建YSY6單缺菌株以及YSY6和ATG8雙缺菌株。發(fā)現(xiàn)雙缺菌株對(duì)幾種重金屬離子以及糖基化抑制劑衣霉素(tunicamycin,TN)顯著敏感。說(shuō)明Ysy6和Atg8在離子和藥物耐受過(guò)程中發(fā)揮協(xié)同作用。(3)探究對(duì)TN敏感的機(jī)制過(guò)程中發(fā)現(xiàn),在此壓力條件下,雙缺菌株的質(zhì)膜損傷加劇,液泡膜通透性增加,活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平升高,氧化壓力應(yīng)答(oxidative stress response,OSR)基因表達(dá)上升,并且會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的線粒體功能障礙,如線粒體形態(tài)改變,膜電勢(shì)降低,ATP含量降低等。同時(shí),白念珠菌非折疊蛋白應(yīng)答途徑(the unfolded protein response,UPR)中,HAC1 mRNA剪接受阻,UPR激活水平減弱。說(shuō)明Ysy6和Atg8面對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力時(shí)可以影響UPR途徑中HAC1 mRNA的剪接過(guò)程,從而激活UPR途徑。(4)YSY6和ATG8同時(shí)缺失會(huì)影響白念珠菌的形態(tài)發(fā)生能力,如雙缺菌株中菌絲發(fā)育能力、絮凝能力、嵌入式生長(zhǎng)能力、黏附能力以及生物膜形成能力均顯著降低。形態(tài)發(fā)生能力的減弱也影響了白念珠菌的致病性,如減弱了白念珠菌分泌性磷脂酶和天冬氨酸蛋白酶的分泌能力,降低了對(duì)巨噬細(xì)胞的殺傷能力,而且喪失了對(duì)小鼠感染的能力。說(shuō)明Ysy6和Atg8對(duì)白念珠菌的毒力至關(guān)重要,是白念珠菌的潛在毒力因子。本實(shí)驗(yàn)主要研究了Ysy6和Atg8在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力應(yīng)答過(guò)程、形態(tài)發(fā)生及致病性方面所發(fā)揮的功能,豐富了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力應(yīng)答機(jī)制的內(nèi)容,并為臨床上研發(fā)新的抗真菌藥物提供一定的理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

圖 1.1 白念珠菌的形態(tài)[6]Fig 1.1 The morphology of C.albicans于該菌感染的人數(shù)約有 1 萬(wàn)人左右。很顯然，這種感染是一個(gè)重大的公共健康問(wèn)題。目前，雖然由其他念珠菌引起的感染在逐年增加，但是大部分念珠菌感

圖 1.2 白念珠菌的組織侵染[25]Fig 1.2 The tissue invision of C.albicans成鮮明對(duì)比的是，細(xì)胞也可以形成豆?fàn)�、體積是白色細(xì)胞的三倍、重細(xì)胞的兩倍的更大更平坦的“灰色”菌落，，但是這些灰色細(xì)胞中包含的
【學(xué)位授予單位】：南開大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R379.4

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7 闞思s

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