【摘要】：腦腸軸(brain-gut axis)是由胃腸道、腸神經(jīng)系統(tǒng)和大腦構(gòu)成的網(wǎng)絡,這些實體之間的雙向信息交流影響著免疫、消化、代謝以及應激反應等重要生理功能。越來越多的動物和臨床研究表明腸道菌群在腦腸軸雙向應答中發(fā)揮了重要作用,尤其是與中樞神經(jīng)的功能發(fā)育、疾病發(fā)生等密切相關(guān)。嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus,La)作為腸道菌群中主要益生菌之一,對人類的健康有著積極的作用,在食品行業(yè)和醫(yī)藥領(lǐng)域都得到廣泛的應用,然而目前對于益生菌與神經(jīng)系統(tǒng)之間相互影響的原因還不明確。綜合以上研究背景,本課題首先對嗜酸乳桿菌進行復蘇和活化,測定其生長曲線,并對其生長時期進行分析來獲取嗜酸乳桿菌上清液(La supernatant,L.a.s),并利用高效液相色譜建立檢測嗜酸乳桿菌上清液中代謝有機酸含量的方法,最后研究L.a.s對神經(jīng)干細胞(Neural Stem Cells,NSCs)增殖的影響。本研究首先對購自中國普通微生物菌種保藏中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)的嗜酸乳桿菌(保藏編號:ATCC 4356)進行復蘇和活化,利用掃描電鏡觀察嗜酸乳桿菌的微觀形態(tài),并測定其生長曲線,發(fā)現(xiàn)嗜酸乳桿菌的生長穩(wěn)定期在20h到32h之間。之后對L.a.s中乳酸和乙酸的HPLC檢測方法進行優(yōu)化,獲得最優(yōu)色譜檢測條件:用C_(18)色譜柱進行分離,柱溫30?C,流動相為0.01mol/L NaH_2PO_4溶液(1mol/L磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.6),流速1mL/min,檢測波長215nm,整個過程可在10min內(nèi)完成。在優(yōu)化的色譜條件下,乳酸和乙酸的線性范圍為1.0-50.0mmol/L,乳酸和乙酸的加標回收率分別為97.5%-103.0%和96.5%-103.8%,相對標準偏差分別為1.39%和3.56%。利用該方法對處于生長穩(wěn)定期的上清液進行定量分析,發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)時間為30h的L.a.s,乳酸和乙酸含量達到最大值,說明此時L.a.s中代謝產(chǎn)物含量最大,所以選擇培養(yǎng)時間為30h的L.a.s,來進行下一步研究。最后考察L.a.s對NSCs增殖的影響,先進行NSCs的原代提取和傳代培養(yǎng),免疫細胞化學鑒定結(jié)果顯示,提取的NSCs具有自我更新和多向分化潛能,可以作為實驗所需的種子細胞。將培養(yǎng)時間為30h的L.a.s按不同體積分數(shù)作用NSCs,形態(tài)學觀察及死活染色結(jié)果表明,L.a.s作用下的NSCs生長正常。CCK-8法檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)在加入的L.a.s體積分數(shù)為4%時,NSCs活率達到最高,細胞的存活率提高至對照組的122.72±7.37%,該濃度下可進一步考察L.a.s對NSCs分化行為的影響,從而更深入的探究其神經(jīng)保護作用。
【學位授予單位】：大連理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R371

【參考文獻】

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本文編號：2643823