發(fā)布時(shí)間：2020-04-28 20:06

【摘要】：腦腸軸(brain-gut axis)是由胃腸道、腸神經(jīng)系統(tǒng)和大腦構(gòu)成的網(wǎng)絡(luò),這些實(shí)體之間的雙向信息交流影響著免疫、消化、代謝以及應(yīng)激反應(yīng)等重要生理功能。越來越多的動(dòng)物和臨床研究表明腸道菌群在腦腸軸雙向應(yīng)答中發(fā)揮了重要作用,尤其是與中樞神經(jīng)的功能發(fā)育、疾病發(fā)生等密切相關(guān)。嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus,La)作為腸道菌群中主要益生菌之一,對(duì)人類的健康有著積極的作用,在食品行業(yè)和醫(yī)藥領(lǐng)域都得到廣泛的應(yīng)用,然而目前對(duì)于益生菌與神經(jīng)系統(tǒng)之間相互影響的原因還不明確。綜合以上研究背景,本課題首先對(duì)嗜酸乳桿菌進(jìn)行復(fù)蘇和活化,測(cè)定其生長(zhǎng)曲線,并對(duì)其生長(zhǎng)時(shí)期進(jìn)行分析來獲取嗜酸乳桿菌上清液(La supernatant,L.a.s),并利用高效液相色譜建立檢測(cè)嗜酸乳桿菌上清液中代謝有機(jī)酸含量的方法,最后研究L.a.s對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞(Neural Stem Cells,NSCs)增殖的影響。本研究首先對(duì)購自中國(guó)普通微生物菌種保藏中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)的嗜酸乳桿菌(保藏編號(hào):ATCC 4356)進(jìn)行復(fù)蘇和活化,利用掃描電鏡觀察嗜酸乳桿菌的微觀形態(tài),并測(cè)定其生長(zhǎng)曲線,發(fā)現(xiàn)嗜酸乳桿菌的生長(zhǎng)穩(wěn)定期在20h到32h之間。之后對(duì)L.a.s中乳酸和乙酸的HPLC檢測(cè)方法進(jìn)行優(yōu)化,獲得最優(yōu)色譜檢測(cè)條件:用C_(18)色譜柱進(jìn)行分離,柱溫30?C,流動(dòng)相為0.01mol/L NaH_2PO_4溶液(1mol/L磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.6),流速1mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)215nm,整個(gè)過程可在10min內(nèi)完成。在優(yōu)化的色譜條件下,乳酸和乙酸的線性范圍為1.0-50.0mmol/L,乳酸和乙酸的加標(biāo)回收率分別為97.5%-103.0%和96.5%-103.8%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.39%和3.56%。利用該方法對(duì)處于生長(zhǎng)穩(wěn)定期的上清液進(jìn)行定量分析,發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)時(shí)間為30h的L.a.s,乳酸和乙酸含量達(dá)到最大值,說明此時(shí)L.a.s中代謝產(chǎn)物含量最大,所以選擇培養(yǎng)時(shí)間為30h的L.a.s,來進(jìn)行下一步研究。最后考察L.a.s對(duì)NSCs增殖的影響,先進(jìn)行NSCs的原代提取和傳代培養(yǎng),免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定結(jié)果顯示,提取的NSCs具有自我更新和多向分化潛能,可以作為實(shí)驗(yàn)所需的種子細(xì)胞。將培養(yǎng)時(shí)間為30h的L.a.s按不同體積分?jǐn)?shù)作用NSCs,形態(tài)學(xué)觀察及死活染色結(jié)果表明,L.a.s作用下的NSCs生長(zhǎng)正常。CCK-8法檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在加入的L.a.s體積分?jǐn)?shù)為4%時(shí),NSCs活率達(dá)到最高,細(xì)胞的存活率提高至對(duì)照組的122.72±7.37%,該濃度下可進(jìn)一步考察L.a.s對(duì)NSCs分化行為的影響,從而更深入的探究其神經(jīng)保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R371

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2643823