【摘要】：目的： 觀察雌激素受體（estrogen receptor，ER）抑制劑（ICI182780）、ERα特異性抑制劑（MPP）和ERβ特異性抑制劑（PHTPP）以及ERα特異性抗體對小鼠植入前胚體外發(fā)育的影響；探討ERα特異性抑制劑（MPP）對小鼠合子基因組激活（zygotic genome activation，ZGA）中四個相關(guān)基因，以及ERα目的基因c-Myc的表達影響，為進一步闡明ERα在小鼠植入前胚發(fā)育中的作用奠定基礎(chǔ)。 方法： 1、分別取KM雌性小鼠與KM雄性小鼠（♀KM×♂KM），以及B6C3F1雌性小鼠與KM雄性小鼠（♀B6C3F1×♂KM）交配所得的1-細胞胚和2-細胞胚，觀察其在M16培養(yǎng)液、不同濃度的ICI182780培養(yǎng)液、不同濃度的MPP培養(yǎng)液、不同濃度的PHTPP培養(yǎng)液以及不同濃度的ERα特異性抗體培養(yǎng)液中體外發(fā)育的情況； 2、收集KM小鼠1-細胞胚，分別置于M16和含MPP（25μΜ）的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，獲取體外發(fā)育的2-細胞胚： ⑴激光共聚焦掃描顯微鏡觀察胚內(nèi)核ERα定位和表達情況； ⑵Western-blot檢測ERα、c-MYC蛋白水平； ⑶Realtime-PCR測定ERα、c-Myc、Jmjd2c、MuERV-L、Zscan4d、Hsp70.1和eIF1AmRNA水平。 結(jié)果： 1、ER抑制劑（ICI182780）、ERα特異性抑制劑（MPP）和ERα特異性抗體使小鼠1-細胞胚和2-細胞胚體外發(fā)育受阻于2-細胞階段，，很少能過渡至4-細胞胚；而ERβ特異性抑制劑（PHTPP）無上述作用； 2、激光共聚焦掃描顯微鏡顯示，MPP組中，核ERα熒光相對強度低于M16組（P0.01）； 3、Western blot檢測表明，MPP組和M16組中，ERα、c-MYC蛋白表達水平?jīng)]有明顯差異，不具有統(tǒng)計學意義（P0.05）； 4、Realtime-PCR結(jié)果提示，MPP組中，MuERV-L mRNA水平明顯低于M16組（P0.01），而其他基因mRNA水平與M16組比較，沒有明顯差別（P0.05）。 結(jié)論： ER抑制劑（ICI182780）、ERα特異性抑制劑（MPP）和ERα特異性抗體對小鼠植入前胚2-細胞至4-細胞體外發(fā)育過渡具有抑制作用，進而使植入前胚無法發(fā)育至囊胚階段，而ERβ特異性抑制劑（PHTPP）對其抑制效果不明顯，提示ERα在小鼠植入前胚2-細胞至4-細胞體外發(fā)育過渡中的作用；ERα特異性抑制劑使合子基因組激活相關(guān)基因MuERV-L mRNA表達水平下調(diào)，提示ERα可能是通過影響與ZGA相關(guān)基因的表達水平來發(fā)揮其在合子基因組激活中的作用。
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R329;Q954.4

【參考文獻】

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本文編號：2585826