發(fā)布時間：2020-03-09 10:12

【摘要】：目的建立MELC體系(體外模擬混合皮膚移植模型),探討B(tài)7-H1分子在自體角朊細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫抑制中的作用和相關(guān)機制。 方法 1.分離兩只不同KM乳鼠(a,b乳鼠新生1-3日齡,無毛發(fā)生長)的淋巴細(xì)胞,表皮細(xì)胞,角朊細(xì)胞,并用細(xì)胞免疫組織化學(xué)方法鑒定角朊細(xì)胞。 2.用分離的淋巴細(xì)胞,表皮細(xì)胞,角朊細(xì)胞,建立MELC體系。引入自體角朊細(xì)胞,在體外模擬自體皮島效應(yīng)。 3.在有自體角朊細(xì)胞參與的與無自體角朊細(xì)胞參與的MELC體系中,分別混合培養(yǎng)12h,24h,36h后,分離角朊細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測B7-H1的表達(dá)。同樣條件下分離淋巴細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測PD-1的表達(dá)。 4.在有自體角朊細(xì)胞參與的與無自體角朊細(xì)胞參與的MELC體系中,分別混合培養(yǎng)12h,24h,36h后,分離淋巴細(xì)胞,提取RNA,實時熒光定量PCR檢測IL-10,Foxp3,GATA-3 mRNA的表達(dá)。 結(jié)果 1.分離得到的淋巴細(xì)胞,表皮細(xì)胞活性好,存活率高。分離的角朊細(xì)胞純度高,活性好,存活率高,采用細(xì)胞免疫組織化學(xué)鑒定,陽性率高。 2.原代培養(yǎng)的角朊細(xì)胞,表皮細(xì)胞,淋巴細(xì)胞建立的MELC體系穩(wěn)定,混合培養(yǎng)穩(wěn)定。 3.在有自體角朊細(xì)胞參與的MELC體系中,12h,24h,36h后,分離角朊細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測B7-H1表達(dá)呈逐漸升高趨勢,有顯著差異(P0.05)。同樣條件下分離淋巴細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測PD-1,表達(dá)呈升高趨勢,有顯著差異(P0.05)。而無自體角朊細(xì)胞參與的MELC體系中,角朊細(xì)胞,淋巴細(xì)胞均無顯著差異(P0.05)。 4.在有自體角朊細(xì)胞參與的MELC體系中,12h,24h,36h后,分離淋巴細(xì)胞,提取RNA,實時熒光定量PCR檢測IL-10,Foxp3,GATA-3的表達(dá)呈升高趨勢,有顯著差異(P0.05)。而無自體角朊細(xì)胞參與的MELC體系中,無以上表達(dá)趨勢,均無顯著差異(P0.05)。 結(jié)論 1.混合皮膚移植中,自體角朊細(xì)胞可表達(dá)共刺激分子B7-H1,介導(dǎo)T細(xì)胞的活化,并伴隨B7-H1受體PD-1在T淋巴細(xì)胞表面表達(dá)的上調(diào)。 2. MELC體系中分泌的IL-10來源于淋巴細(xì)胞,并非角朊細(xì)胞。 3. MELC體系中誘導(dǎo)出一群Foxp3+的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,負(fù)向調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。 4.自體角朊細(xì)胞通過表達(dá)B7-H1,使Th2細(xì)胞含量升高。
【圖文】：

2 流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果2.1 角朊細(xì)胞表面 B7-H1 的表達(dá)在有自體角朊細(xì)胞參與的實驗組 MELC (La+Eb+KCa)中，12h 后，KC 即的表達(dá)，依次檢測 24h,36h，，B7-H1 的表達(dá)呈遞增趨勢(P<0.05,有統(tǒng)計學(xué)2-4）而未有自體角朊細(xì)胞參與的各對照組 (La+Eb+KCb，La+KCa)中，呈極低表達(dá)（圖 5-10），各組之間并無差異（P㧐0.05）(圖 2-4) 實驗組 MELC (La+Eb+KCa)，B7-H1 表達(dá)呈遞增趨勢

(圖 8-10) 對照組 (La+KCa)，B7-H1 無表達(dá)趨勢2.2 MELC 體系中淋巴細(xì)胞 PD-1 的表達(dá) 在 La+Eb+KCa體系中，12h,2淋巴細(xì)胞 PD-1 的表達(dá)（圖 11-13），呈遞增趨勢（P<0.05,有統(tǒng)計學(xué)意
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 張敬喜;曹穎平;王梅華;鄭澤銑;李寧麗;沈佰華;周光炎;;B7-H1分子在混合皮膚移植中自體角朊細(xì)胞誘導(dǎo)的抑制作用[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2006年02期

2 沈佰華,周洪,謝晉,陳福祥,李寧麗,周光炎;混合表皮淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系中IL-10表達(dá)在誘導(dǎo)免疫抑制中的作用[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2001年02期

本文編號：2585796