【摘要】：目的:以p MSCV-puro載體(MGP)為骨架,構(gòu)建帶有綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的小鼠micro RNA-31(mi R-31)反轉(zhuǎn)錄病毒載體MGP-31。方法:PCR擴(kuò)增帶有NotⅠ以及XhoⅠ酶切位點(diǎn)的mi R31的前體(premi R-31)序列,然后克隆至MGP載體上,測序鑒定。將構(gòu)建的MGP-31質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK-293T細(xì)胞,通過熒光顯微鏡觀察GFP的表達(dá)情況,實(shí)時(shí)定量PCR檢測mi R-31轉(zhuǎn)錄水平以評估MGP-31質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果:基因序列分析顯示pre-mi R-31基因序列正確,并成功插入MGP載體,轉(zhuǎn)染HEK-293T細(xì)胞可表達(dá)GFP,實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果表明轉(zhuǎn)染MGP-31質(zhì)粒的HEK-293T細(xì)胞可高表達(dá)mi R-31。結(jié)論:MGP-31反轉(zhuǎn)錄病毒載體構(gòu)建成功。

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