【摘要】：EB病毒是全世界流行的γ型人類皰疹病毒,具有嗜B淋巴細(xì)胞性,病因?qū)W上與中國南方地區(qū)及東南亞的未分化型鼻咽癌(uNPC)、非洲赤道地區(qū)的Burkitt淋巴瘤關(guān)系密切,這兩種疾病在其他地區(qū)卻比較少見。 目前EB病毒及其相關(guān)腫瘤的治療方法依然有限,鑒于病毒在這些疾病的發(fā)病機(jī)制中所扮演的重要角色,采用EB病毒蛋白抗原的分子干預(yù)措施可能是預(yù)防治療EB病毒相關(guān)疾病的有效措施。在這些方案中,疫苗接種免疫應(yīng)該是研究中的首要選擇,在本課題中,我們通過基因工程技術(shù)構(gòu)建了gp350和C3d3的融合質(zhì)粒,希望表達(dá)的融合蛋白在進(jìn)一步研究中具有特異的免疫原性。 目的構(gòu)建EB病毒包膜糖蛋白gp350全長序列及其與三個補體片段C3d串聯(lián)基因在人體真核細(xì)胞中表達(dá)的載體,并進(jìn)行其免疫功能的初步研究。 方法以pcDNA3.1+gp350為模板PCR擴(kuò)增出gp350 cDNA全長片段,將PCR產(chǎn)物經(jīng)BglⅡ和BamHⅠ酶切消化后與經(jīng)同樣兩個限制性內(nèi)切酶消化的真核表達(dá)載體pSG.SS.YL和pSG.SS.C3d3.YL連接,轉(zhuǎn)化后挑取陽性克隆進(jìn)行PCR、酶切鑒定并測序;然后將純化的重組載體用脂質(zhì)體法分別轉(zhuǎn)染人類Hela細(xì)胞培養(yǎng)24h,分別用Western blot及細(xì)胞免疫化學(xué)染色檢測gp350蛋白和gp350-C3d3融合蛋白的表達(dá)。 結(jié)果成功構(gòu)建含gp350全長基因序列的載體pSG.SS.gp350.YL和pSG.SS. gp350.C3d3.YL;轉(zhuǎn)染人類Hela細(xì)胞后,經(jīng)細(xì)胞免疫化學(xué)染色及Western blot檢測顯示:轉(zhuǎn)染組均能常規(guī)水平表達(dá),對照組則無該蛋白表達(dá),但兩轉(zhuǎn)染組的表達(dá)量無明顯差異。 結(jié)論成功構(gòu)建gp350的兩個真核表達(dá)質(zhì)粒,并能夠在人體Hela細(xì)胞中表達(dá)相應(yīng)蛋白,為下一步進(jìn)行在體內(nèi)免疫環(huán)境下檢測其生物學(xué)活性奠定基礎(chǔ)。
【圖文】：

圖 2大腸桿菌 TOP10 購自北京天根公司，-72．主要試劑和儀器2.1 主要試劑Amp 柱式質(zhì)粒小量提取試劑盒 BglⅡ、BamHⅠ XbaⅠ、KpnⅠ XhoⅠ GoldviewTM核酸染料 50×TAE 胰蛋白胨

圖 8 測序拼接后文件截圖顯示酶切位點名稱分別于其堿基后在圓括號標(biāo)注，，中間連續(xù)堿基序列為 gp350 基因，共 2556bp(包含啟動密碼子及終止子)。2．載體質(zhì)粒 pSG.SS.YL 和 pSG.SS.C3d3.YL 的酶切鑒定1） pSG.SS.YL/BglⅡ&BamHⅠ如下圖
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R346

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 余敏,李大金;分子佐劑C3d的研究進(jìn)展[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2004年04期

2 李大金;我國生殖免疫學(xué)研究回顧及展望[J];中國免疫學(xué)雜志;2004年01期

3 余敏,趙欣榮,李大金,王秀麗,袁敏敏,姚曉英;分子佐劑C3d3與hCGβ基因融合增強hCGβ基因疫苗體液免疫應(yīng)答[J];中國免疫學(xué)雜志;2005年07期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前5條

1 王秀麗;hCGβ-C3d3融合蛋白疫苗的體液免疫效應(yīng)及其抗生育潛能[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

2 余敏;分子佐劑C3d3與hCGβ基因融合對鼠DNA免疫增強抗hCGβ體液免疫效應(yīng)[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

3 薛春林;分子佐劑對生長抑素基因免疫的作用及其機(jī)制研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

4 李華萍;分子佐劑hC3d3與hCGβ融合增強人外周免疫活性細(xì)胞對hCGβ抗原的反應(yīng)性[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

5 賀曉菊;分子佐劑C3d3增強hCGβDNA和粘膜疫苗體液免疫效應(yīng)的機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 趙占中;新孢子蟲NcSRS2 DNA疫苗的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

2 王偉;構(gòu)建精子特異CATSPER1 DNA避孕疫苗的初步研究[D];暨南大學(xué);2006年

3 趙娜;C3d對分泌型柯薩奇病毒B組3型VP1 DNA疫苗的免疫增強作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2007年

本文編號：2551693