【摘要】：[目的]： 探討Survivin反義寡核苷酸對裸鼠荷胰腺癌的抑制作用以及與Cox-2、PTEN和CEACAM-1在胰腺癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性。 [方法]： 構(gòu)建28只人胰腺癌裸鼠模型,隨機分配到空白對照組、脂質(zhì)體組、ASODN組和SODN組,每組7只。分別于瘤周及瘤體注射PBS,陽離子脂質(zhì)體,ASODN/LiP及SODN/LiP,每2天1次,共10次。治療結(jié)束后2天,切取瘤體,測算瘤重和抑瘤率以評價腫瘤生長情況,瘤組織石臘切片分別行HE、免疫組化和DNA末端原位標(biāo)記法(TUNEL法)染色以評價瘤組織病理形態(tài)，，Survivin與Cox-2、PTEN、CEACAM-1的表達(dá)。應(yīng)用半定量PCR方法檢測Survivin與Cox-2、PTEN、CEACAM-1mRNA的表達(dá)。 [結(jié)果]： 1.裸鼠移植瘤治療結(jié)束時,LiP組、空白對照組、SODN組、ASODN組腫瘤生長指數(shù)分別為：(6.81±2.79)%,(7.31±2.65)%,(6.70±2.06)%,(-0.58±4.27)%；LiP組、空白對照組、SODN組、ASODN組腫瘤質(zhì)量均數(shù)分別為：(1.39±0.09)g,(1.44±0.08)g,(1.33±0.11)g,(0.84±0.07)g。ASODN組裸鼠腫瘤生長明顯受到抑制,差異有顯著性意義(P0.05)。抑瘤率測定可見ASODN組抑瘤率明顯高于LiP組、空白對照組、SODN組,差異有顯著性意義(P0.05)。SODN組與其他兩組差異無顯著性意義。 2.Survivin-ASODN轉(zhuǎn)染復(fù)合物治療后裸鼠重要臟器的組織學(xué)觀察。為了解Survivin-ASODN轉(zhuǎn)染復(fù)合物對裸鼠有無毒副作用,取治療組小裸鼠心、肝、脾、腎、肺等重要臟器行常規(guī)病理檢查未見明顯異常。 3.裸鼠移植瘤細(xì)胞Survivin mRNA表達(dá) 通過RT-PCR檢測裸鼠移植瘤細(xì)胞對照組和ASODN處理組均在346bp處出現(xiàn)特異性的Survivin條帶。ASODN組Survivin mRNA為(0.39±0.12), SODN組、LiP組和空白對照組分別為(0.57±0.14,0.62±0.15,0.68±0.09),ASODN組與空白對照組差異有顯著性意義(PO.05)；SODN組Survivin mRNA表達(dá)與其他兩組相比差異無顯著性意義(PO.05)。RT-PCR法檢測靶向抑制Survivin表達(dá)對胰腺癌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Cox-2、PTEN. CEACAM-1mRNA表達(dá)的影響：(1)Cox-2mRNA表達(dá)狀況：ASODN組Cox-2mRNA表達(dá)明顯低于空白對照組、LiP組及SODN組(0.53±0.27VS0.76±0.02,0.75±0.21,0.72±0.24,P0.05),SODN組Cox-2mRNA表達(dá)與其他兩組相比,差異有顯著性意義(PO.05)；(2)PTEN mRNA表達(dá)狀況：ASODN組PTEN mRNA表達(dá)明顯高于空白對照組.SODN及LiP組(1.42±0.15VS0.97±0.63,1.13±0.15,1.06±0.12,P0.05),SODN組PTEN mRNA表達(dá)與其他兩組相比差異無顯著性意義(PO.05)；(3)CEACAM-1mRNA表達(dá)狀況：ASODN組CEACAM-1mRNA表達(dá)明顯低于空白對照組、SODN及LiP組(0.50±0.22VS0.71±0.02,0.68±0.23,0.69±0.23,P0.05),SODN組CEACAM-1mRNA表達(dá)與其他兩組相比,差異也有顯著性意義(PO.05)。在胰腺癌組織中Survivin與Cox-2、CEACAM-1之間呈顯著正性相關(guān)(r值分別為0.615,0.715,P0.02),而PTEN與Cox-2、Surviving、CEACAM-1之間呈顯著負(fù)性相關(guān)(r值分別為-0.762,-0.561,-0.807,P0.02)。 4.蘇木精—伊紅染色顯示4組瘤塊標(biāo)本均有移植胰腺癌的典型組織學(xué)表現(xiàn)。肉眼觀察：腫瘤橢圓形,結(jié)節(jié)狀,有包膜,表面光滑,個別瘤體表面有破潰。剖面實性,灰白色。光鏡觀察：癌細(xì)胞呈圓形或多邊形,胞漿紅染。胞核圓形,居中,核大而深染,核漿比例增大,異型性明顯,核分裂像易見。ASODN組中可見成片的凋亡細(xì)胞,細(xì)胞體積縮小,胞漿固縮,LiP組、空白對照組、SODN組偶見凋亡細(xì)胞。 5.裸鼠移植瘤細(xì)胞Survivin蛋白表達(dá)Survivin蛋白在裸鼠移植瘤細(xì)胞中有高度表達(dá)。空白對照組、LiP組、SODN組與ASODN組相比較,差異有顯著性意義(P0.05)；SODN組Survivin蛋白與其他兩組相比,三者之間差異無顯著性意義(P0.05)。免疫組化法檢測靶向抑制Survivin表達(dá)對胰腺癌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Cox-2、PTEN、 CEACAM-1蛋白表達(dá)的影響：(1)Cox-2蛋白表達(dá)狀況：ASODN組Cox-2蛋白表達(dá)明顯低于空白對照組、LiP組及SODN組(P0.01),SODN組Cox-2蛋白表達(dá)與其他兩組相比差異無顯著性意義(PO.05)；(2) PTEN蛋白表達(dá)狀況：ASODN組PTEN蛋白表達(dá)明顯高于SODN組、空白對照組及LiP組(P0.01),SODN組PTEN蛋白表達(dá)與其他兩組相比無顯著性意義(P0.01)；(3)CEACAM-1蛋白表達(dá)狀況：Survivin ASODN組CEACAM-1蛋白表達(dá)明顯低于空白對照組、SODN及LiP組(P0.01),SODN組CEACAM-1蛋白表達(dá)與其他兩組相比無顯著性意義(P0.05)。 6. TUNEL法檢測顯示ASODN組凋亡率達(dá)(20.2±1.05)%而SODN組、空白對照組、LiP組凋亡率為(7.71±0.61)%、(4.62±0.66)%、(4.98±0.064)%。 [結(jié)論]： Survivin反義寡核苷酸可有效地抑制人胰腺癌裸鼠皮下腫瘤的生長速度,并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。Survivin在抑制細(xì)胞凋亡的同時還可能引起了細(xì)胞的增殖,從而通過抑制細(xì)胞凋亡和促進細(xì)胞增殖的雙重作用來促進腫瘤的進展。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R735.9;R-332

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10 李平,李兆申,張z

本文編號：2545327