【摘要】：血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)定位于血管中膜,是血管壁的重要組成細胞之一。在生理條件下, VSMCs通過收縮和舒張調節(jié)血管張力,并分泌和釋放多種血管調節(jié)因子以維持血管的正常功能。外界環(huán)境的變化可以導致VSMCs表型由收縮型向合成型轉化,進而由中膜遷移到內膜下間隙。VSMCs異常增殖是動脈粥樣硬化、血管再狹窄和高血壓等血管性疾病的病理基礎之一。影響VSMCs增殖的因素包括多種細胞因子、生長因子及血管活性物質的刺激。其中血管緊張素(Angiotensin Ⅱ, Angll)誘導的VSMCs增殖是一條十分重要的途徑。AngⅡ與受體結合后可提高胞內活性氧(ROS)的含量并激活多條信號通路,最終實現(xiàn)細胞的過度增殖。 谷胱苷肽S-轉移酶(Glutathione S-Transferases, GST)是體內代謝異源物質的一種同工酶超家族,包括α、μ、π等7種亞型,其中GSTp是哺乳動物體內含量最為豐富的一種亞型,不僅可以參與細胞內ROS的清除,還可通過蛋白與蛋白之間的結合影響胞內一系列信號分子的活性。由于其在腫瘤細胞中含量豐富,因而之前的研究主要集中與GSTp與癌癥之間的關系。最近有報導顯示GST家族中另一成員GSTm可以抑制VSMCs的增殖和氧化應激反應,提示了GSTm可能通過抑制VSMCs增殖而對動脈粥樣硬化等疾病進行調控。本實驗室之前的研究表明GSTp可以抑制AngⅡ誘導的VSMCs增殖和遷移。本課題的目的在于比較GSTp與GSTm對AngⅡ誘導的VSMCs增殖的抑制作用的強弱,并研究GSTp抑制VSMCs增殖的作用機制。 本實驗使用MTT法檢測過表達GSTp、GSTm以及GSTp轉移酶活性突變體Y7F對AngⅡ誘導的VSMCs增殖的抑制作用；流式細胞術進一步檢測VSMCs的細胞周期；蛋白免疫印跡檢測過表達GSTp、GSTm和Y7F對STAT3磷酸化水平的影響；RNAi下調胞內GSTp水平并檢測VSMCs的增殖和STAT3磷酸化情況。 經(jīng)過研究我們發(fā)現(xiàn),GSTp對AngⅡ誘導的VSMCs增殖具有抑制作用,并可以降低進入S期的細胞數(shù),且這種抑制作用較GSTm更強；通過RNAi下調胞內GSTp水平后,VSMCs增殖能力增強；轉染GSTp可以降低AngⅡ誘導的STAT3磷酸化水平；而GSTp轉移酶活性缺失突變體Y7F對AngⅡ誘導的VSMCs增殖及STAT3磷酸化的抑制作用較GSTp弱；此外三種GST對AngⅡ誘導的STAT1、STAT5磷酸化均沒有影響。 由此我們可以得出GSTp對AngⅡ誘導的VSMCs過度增殖及STAT3磷酸化的抑制作用優(yōu)于GSTm。其調控VSMCs過度增殖的機制是特異性地抑制增殖相關信號通路JAK/STAT中STAT3的磷酸化,從而最終抑制的增殖活動,且這一調控機制與GSTp的轉移酶活性有關。這些結果表明GSTp在維持VSMCs穩(wěn)定性及動脈粥樣硬化等心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展中起到了非常重要的作用。
【學位授予單位】：南京大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R363

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