發(fā)布時間：2019-08-26 11:09

【摘要】：目的多巴胺(dopamine,DA)與其受體結合調節(jié)腸道動力、黏膜分泌及屏障等,黏膜下神經元參與DA對黏膜的生理調節(jié),但其受體的具體分布尚不明了。通過檢測DA受體在大鼠結腸黏膜下層的蛋白和mRNA表達及細胞分布,為DA調節(jié)大鼠結腸病理生理機制提供依據。方法用RT-PCR和Western blotting方法定性測定DA受體在大鼠結腸黏膜下層的mRNA和蛋白的表達;免疫熒光雙染色后在激光共聚焦顯微鏡下觀察DA受體在黏膜下血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)能和膽堿能神經元上的分布。結果在大鼠結腸黏膜下層,DA受體D_1、D_2、D_5的mRNA及蛋白均有表達;在黏膜下神經叢VIP能陽性的神經元中有大量分布,其中D_1陽性的神經元占58.94%±2.245%,D_2陽性神經元占52.03%±9.384%,D_5陽性神經元占86.21%±2.902%,且D_5陽性神經元數量顯著高于D_1和D_2;在黏膜下神經叢膽堿能陽性的神經元廣泛表達DA受體,其中D_1陽性神經元占87.75%±7.307%,D_2陽性神經元占88.50%±8.761%,D_5陽性神經元占89.25%±10.75%。結論 DA受體在大鼠結腸黏膜下層有D_1、D_2及D_5的表達,且在VIP能及膽堿能神經元上均有分布,其中D_5受體在VIP能神經元上的分布顯著高于D_1及D_2受體。本研究可為深入探討DA調節(jié)結腸黏膜生理及病理機制提供形態(tài)學依據。
【圖文】：

首都醫(yī)科大學學報第38卷1.5統(tǒng)計學方法應用GraphPadPrism5.0軟件進行統(tǒng)計處理，數據統(tǒng)計描述以均數±標準誤(x±SE)表示，結果來自4只大鼠。采用“One-wayANOVA”方法分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2結果2.1多巴胺受體在大鼠結腸的mＲNA及蛋白表達用PCＲ技術檢測了DA受體在大鼠結腸的mＲ-NA，如圖1A顯示:DA受體D1、D2、D5的mＲNA有明顯表達，但未檢測到DA受體D3及D4的表達。進一步用Westernblotting方法檢測了相應蛋白的表達，結果如圖1B所示:D1在120000處、D2在55000處、D5在100000和50000處均有明顯且特異的條帶，提示DA受體在大鼠結腸黏膜下組織中有D1、D2及D5的表達。2.2多巴胺受體在大鼠結腸膽堿能神經元上的分布ChAT是ACh的合成酶，在神經元內合成，可作為膽堿能神經元的標志。因此在本研究中，以ChAT為膽堿能神經元標記進行免疫熒光染色，在激光共聚焦顯微鏡下分別觀察ChAT免疫陽性神經元在黏膜下神經叢的分布及DA受體D1、D2、D5在大鼠遠端結腸黏膜下神經叢內ChAT免疫反應陽性神經元上的表達情況，并進行統(tǒng)計。結果如圖2所示，黏膜下分布有圖1多巴胺受體mＲNA及蛋白在大鼠結腸黏膜下層的表達Fig.1mＲNAandproteinexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosaA:mＲNAexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosa;n=4;B:proteinexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosa;n=4;DA:dopa-mine;DAＲ:dopaminereceptors．圖2多巴胺受體在大鼠結腸黏膜下膽堿能神經元上的表達及共存率比較Fig.2ThedistributionofdopaminereceptorsonChAT-IＲneuronsinsubmucosalplexusofratcolon，andcomparisonoftheirco-existenceA:greenfluorescencestainingfordopamine

在120000處、D2在55000處、D5在100000和50000處均有明顯且特異的條帶，提示DA受體在大鼠結腸黏膜下組織中有D1、D2及D5的表達。2.2多巴胺受體在大鼠結腸膽堿能神經元上的分布ChAT是ACh的合成酶，在神經元內合成，可作為膽堿能神經元的標志。因此在本研究中，，以ChAT為膽堿能神經元標記進行免疫熒光染色，在激光共聚焦顯微鏡下分別觀察ChAT免疫陽性神經元在黏膜下神經叢的分布及DA受體D1、D2、D5在大鼠遠端結腸黏膜下神經叢內ChAT免疫反應陽性神經元上的表達情況，并進行統(tǒng)計。結果如圖2所示，黏膜下分布有圖1多巴胺受體mＲNA及蛋白在大鼠結腸黏膜下層的表達Fig.1mＲNAandproteinexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosaA:mＲNAexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosa;n=4;B:proteinexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosa;n=4;DA:dopa-mine;DAＲ:dopaminereceptors．圖2多巴胺受體在大鼠結腸黏膜下膽堿能神經元上的表達及共存率比較Fig.2ThedistributionofdopaminereceptorsonChAT-IＲneuronsinsubmucosalplexusofratcolon，andcomparisonoftheirco-existenceA:greenfluorescencestainingfordopaminereceptorsimmunoreactivity，redfluorescencestainingforChATimmunoreactivity;B:co-expressionrateofD1，D2orD5inChAT-IＲneurons，n=4;ChAT-IＲ:cholineacetyltransferaseimmunoreactivity;DAＲ:dopaminereceptors．414
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院免疫學系;首都醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院生理學與病理生理學系;
【基金】：國家自然科學基金(31300954,81370482)~~
【分類號】：R363


本文編號：2529249