【摘要】：目的多巴胺(dopamine,DA)與其受體結(jié)合調(diào)節(jié)腸道動(dòng)力、黏膜分泌及屏障等,黏膜下神經(jīng)元參與DA對(duì)黏膜的生理調(diào)節(jié),但其受體的具體分布尚不明了。通過檢測(cè)DA受體在大鼠結(jié)腸黏膜下層的蛋白和mRNA表達(dá)及細(xì)胞分布,為DA調(diào)節(jié)大鼠結(jié)腸病理生理機(jī)制提供依據(jù)。方法用RT-PCR和Western blotting方法定性測(cè)定DA受體在大鼠結(jié)腸黏膜下層的mRNA和蛋白的表達(dá);免疫熒光雙染色后在激光共聚焦顯微鏡下觀察DA受體在黏膜下血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)能和膽堿能神經(jīng)元上的分布。結(jié)果在大鼠結(jié)腸黏膜下層,DA受體D_1、D_2、D_5的mRNA及蛋白均有表達(dá);在黏膜下神經(jīng)叢VIP能陽(yáng)性的神經(jīng)元中有大量分布,其中D_1陽(yáng)性的神經(jīng)元占58.94%±2.245%,D_2陽(yáng)性神經(jīng)元占52.03%±9.384%,D_5陽(yáng)性神經(jīng)元占86.21%±2.902%,且D_5陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量顯著高于D_1和D_2;在黏膜下神經(jīng)叢膽堿能陽(yáng)性的神經(jīng)元廣泛表達(dá)DA受體,其中D_1陽(yáng)性神經(jīng)元占87.75%±7.307%,D_2陽(yáng)性神經(jīng)元占88.50%±8.761%,D_5陽(yáng)性神經(jīng)元占89.25%±10.75%。結(jié)論 DA受體在大鼠結(jié)腸黏膜下層有D_1、D_2及D_5的表達(dá),且在VIP能及膽堿能神經(jīng)元上均有分布,其中D_5受體在VIP能神經(jīng)元上的分布顯著高于D_1及D_2受體。本研究可為深入探討DA調(diào)節(jié)結(jié)腸黏膜生理及病理機(jī)制提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。
【圖文】：

首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)第38卷1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用GraphPadPrism5.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)描述以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(x±SE)表示，結(jié)果來(lái)自4只大鼠。采用“One-wayANOVA”方法分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1多巴胺受體在大鼠結(jié)腸的mＲNA及蛋白表達(dá)用PCＲ技術(shù)檢測(cè)了DA受體在大鼠結(jié)腸的mＲ-NA，如圖1A顯示:DA受體D1、D2、D5的mＲNA有明顯表達(dá)，但未檢測(cè)到DA受體D3及D4的表達(dá)。進(jìn)一步用Westernblotting方法檢測(cè)了相應(yīng)蛋白的表達(dá)，結(jié)果如圖1B所示:D1在120000處、D2在55000處、D5在100000和50000處均有明顯且特異的條帶，提示DA受體在大鼠結(jié)腸黏膜下組織中有D1、D2及D5的表達(dá)。2.2多巴胺受體在大鼠結(jié)腸膽堿能神經(jīng)元上的分布ChAT是ACh的合成酶，在神經(jīng)元內(nèi)合成，可作為膽堿能神經(jīng)元的標(biāo)志。因此在本研究中，以ChAT為膽堿能神經(jīng)元標(biāo)記進(jìn)行免疫熒光染色，在激光共聚焦顯微鏡下分別觀察ChAT免疫陽(yáng)性神經(jīng)元在黏膜下神經(jīng)叢的分布及DA受體D1、D2、D5在大鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸黏膜下神經(jīng)叢內(nèi)ChAT免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元上的表達(dá)情況，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。結(jié)果如圖2所示，黏膜下分布有圖1多巴胺受體mＲNA及蛋白在大鼠結(jié)腸黏膜下層的表達(dá)Fig.1mＲNAandproteinexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosaA:mＲNAexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosa;n=4;B:proteinexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosa;n=4;DA:dopa-mine;DAＲ:dopaminereceptors．圖2多巴胺受體在大鼠結(jié)腸黏膜下膽堿能神經(jīng)元上的表達(dá)及共存率比較Fig.2ThedistributionofdopaminereceptorsonChAT-IＲneuronsinsubmucosalplexusofratcolon，andcomparisonoftheirco-existenceA:greenfluorescencestainingfordopamine

在120000處、D2在55000處、D5在100000和50000處均有明顯且特異的條帶，提示DA受體在大鼠結(jié)腸黏膜下組織中有D1、D2及D5的表達(dá)。2.2多巴胺受體在大鼠結(jié)腸膽堿能神經(jīng)元上的分布ChAT是ACh的合成酶，在神經(jīng)元內(nèi)合成，可作為膽堿能神經(jīng)元的標(biāo)志。因此在本研究中，，以ChAT為膽堿能神經(jīng)元標(biāo)記進(jìn)行免疫熒光染色，在激光共聚焦顯微鏡下分別觀察ChAT免疫陽(yáng)性神經(jīng)元在黏膜下神經(jīng)叢的分布及DA受體D1、D2、D5在大鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸黏膜下神經(jīng)叢內(nèi)ChAT免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元上的表達(dá)情況，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。結(jié)果如圖2所示，黏膜下分布有圖1多巴胺受體mＲNA及蛋白在大鼠結(jié)腸黏膜下層的表達(dá)Fig.1mＲNAandproteinexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosaA:mＲNAexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosa;n=4;B:proteinexpressionofDAreceptorsinratcolonicsubmucosa;n=4;DA:dopa-mine;DAＲ:dopaminereceptors．圖2多巴胺受體在大鼠結(jié)腸黏膜下膽堿能神經(jīng)元上的表達(dá)及共存率比較Fig.2ThedistributionofdopaminereceptorsonChAT-IＲneuronsinsubmucosalplexusofratcolon，andcomparisonoftheirco-existenceA:greenfluorescencestainingfordopaminereceptorsimmunoreactivity，redfluorescencestainingforChATimmunoreactivity;B:co-expressionrateofD1，D2orD5inChAT-IＲneurons，n=4;ChAT-IＲ:cholineacetyltransferaseimmunoreactivity;DAＲ:dopaminereceptors．414
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系;首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)與病理生理學(xué)系;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31300954,81370482)~~
【分類號(hào)】：R363


本文編號(hào)：2529249