發(fā)布時間：2019-08-11 14:56

【摘要】：目的 本課題在前期應(yīng)用基質(zhì)金屬蛋白酶-7(MMP-7)降低異種(豬)脫細(xì)胞真皮基質(zhì)(Xeno-ADM)中層粘連蛋白(LN)、Ⅳ型膠原蛋白(Col Ⅳ)等高免疫原成分的研究基礎(chǔ)上,應(yīng)用京尼平(Genipin)及真空冷凍干燥處理Xeno-ADM,以進一步降低其免疫原性、提高組織穩(wěn)定性并增加其孔隙率。觀察應(yīng)用MMP-7、Genipin及真空冷凍干燥處理對網(wǎng)狀層豬脫細(xì)胞真皮基質(zhì)(Xeno-ADM)組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞相容性的影響。 方法 機械法取健康雄性白色家豬0.5-0.6mm厚網(wǎng)狀層真皮54塊,每塊約10mm×5mm大小,按隨機數(shù)字表法分為正常對照組(A1組)、脫細(xì)胞組(B組)、脫細(xì)胞+MMP-7組(C組)、脫細(xì)胞+MMP-7+Genipin組(D組)和脫細(xì)胞+MMP-7+Genipin+真空冷凍干燥組(E組),A1組6塊,其余每組12塊；另取同樣大小異體脫細(xì)胞真皮基質(zhì)(Allo-ADM)6塊作為細(xì)胞相容性實驗對照組(A2組)。采用HE染色、免疫組化染色、掃描電鏡、MTT試驗和ELISA法,檢查網(wǎng)狀層真皮中細(xì)胞、細(xì)胞碎片、波形蛋白(Vimentin)、層粘連蛋白(LN)、Ⅳ型膠原蛋白(Col Ⅳ)殘留情況,組織結(jié)構(gòu)變化和細(xì)胞毒性；接種第5代人真皮成纖維細(xì)胞(Fb)于各組網(wǎng)狀層真皮和Allo-ADM真皮面培養(yǎng),動態(tài)觀察Fb生長情況及上清液中白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)的含量變化。 結(jié)果 (1)A1組標(biāo)本中除膠原外,毛囊及毛發(fā)結(jié)構(gòu)完整,含有大量細(xì)胞,Vimentin、 Col Ⅳ陽性染色明顯。B組標(biāo)本毛囊內(nèi)毛發(fā)、上皮根鞘、細(xì)胞核、細(xì)胞碎片樣結(jié)構(gòu)及Vimentin、LN、ColⅣ仍有少量殘留,C、D、E組被完全脫除。D、E組較B、C組韌性增加。4組膠原纖維結(jié)構(gòu)完整,排列與A1組相似且膠原纖維之間間隙均有所增大,其中C、D組間隙相近且均大于B組,E組最大。 (2)根據(jù)GB/T16886.5-2003《醫(yī)療器械生物學(xué)評價》細(xì)胞毒性分級標(biāo)準(zhǔn)判定,細(xì)胞毒性試驗顯示B、C、D、E組細(xì)胞毒性均為0或1級。 (3)Fb在各組均能生長增殖并隨時間延長而增加,D、E組表面細(xì)胞密度較高而A2、C組則組織內(nèi)部較明顯,B組表面及組織內(nèi)部細(xì)胞密度均較其他組低。各組第7天培養(yǎng)液上清中IL-6、IL-8含量(分別為132±14,104±9,122±14,120±12,128±17和135±18,102±17,127±18,134±23,141±24pg/ml)明顯高于第3天(分別為55±13,34±8,48±8,50±13,49±12和93±19,63±11,82±15,82±6,89±16pg/ml)(F值分別為421.185和110.257,P值均小于0.01); A2、C、D、E組之間含量無顯著差異(P0.05),但均較B組高(P0.01)。 結(jié)論 脫細(xì)胞+基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-7)+京尼平(Genipin)+真空冷凍干燥方法制備的低免疫原性豬真皮支架,高抗原性成分明顯降低,組織結(jié)構(gòu)保持正常、間隙擴大,無細(xì)胞毒性,細(xì)胞相容性好。細(xì)胞長入組織內(nèi)部較少可能與京尼平增加組織韌性有關(guān),有待體內(nèi)復(fù)雜情況下進一步研究證實。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R392.1

【參考文獻】

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本文編號：2525358