本文關(guān)鍵詞：b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗結(jié)合及凍干制備工藝相關(guān)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：b型流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)是引起小兒細(xì)菌性腦膜炎和急性呼吸道傳染病的主要致病菌,預(yù)防該疾病的有效方法是接種Hib結(jié)合疫苗。目前市場(chǎng)上尚無經(jīng)CDAP活化多糖,借助ADH與載體蛋白結(jié)合制備而成的Hib結(jié)合疫苗。Hib結(jié)合凍干疫苗現(xiàn)今在國內(nèi)也還未有廠家生產(chǎn)上市,其凍干劑型的研究具有重要的現(xiàn)實(shí)和發(fā)展意義。第一部分：b型流感嗜血桿菌多糖結(jié)合物原液制備工藝的研究本研究采用CDAP法活化符合要求的精制莢膜多糖抗原,通過乙二酰肼(ADH)與破傷風(fēng)類毒素蛋白(TT)共價(jià)結(jié)合,制備Hib莢膜多糖與TT的結(jié)合物原液,結(jié)合物原液經(jīng)過Sepharose 4FF凝膠層析柱純化出多糖蛋白結(jié)合物。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用響應(yīng)面設(shè)計(jì)和正交分析法對(duì)Hib莢膜多糖的活化和結(jié)合過程中部分關(guān)鍵因素進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果顯示,優(yōu)化后多糖與蛋白的結(jié)合率顯著增加,對(duì)優(yōu)化后的結(jié)合物原液中多糖、高分子結(jié)合物、免疫原性等指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè),各項(xiàng)指標(biāo)均符合WHO要求。第二部分：Hib結(jié)合疫苗凍干劑型的研究及其多糖含量的ELISA檢測(cè)本實(shí)驗(yàn)采用乳糖、海藻糖、右旋糖酐-40、甘露醇作為凍干保護(hù)劑對(duì)Hib凍干疫苗的制備進(jìn)行探究。結(jié)果顯示,當(dāng)使用適當(dāng)濃度的右旋糖酐-40和乳糖作為共同凍干保護(hù)劑時(shí),所得凍干制品外形及保護(hù)效果最好。對(duì)凍干制品的高分子結(jié)合物、分子量、免疫原性等各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè),其各指標(biāo)均符合WHO要求。Hib凍干劑型的研制不僅有利于增加疫苗保存時(shí)間,便于疫苗運(yùn)輸,更為DTaP-sIPV-Hib等聯(lián)合疫苗的研究奠定了基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)建立了一種競(jìng)爭(zhēng)法ELISA對(duì)Hib多糖抗原進(jìn)行定量檢測(cè),該法精確度、靈敏度,穩(wěn)定性等指標(biāo)均較好。Hib多糖ELISA檢測(cè)方法的建立能夠彌補(bǔ)傳統(tǒng)化學(xué)法靈敏度低,受雜質(zhì)干擾大的缺點(diǎn),對(duì)提高多糖產(chǎn)量,降低Hib疫苗生產(chǎn)成本具有深遠(yuǎn)意義。
【關(guān)鍵詞】：b型流感嗜血桿菌 莢膜多糖 結(jié)合疫苗 凍干劑型 競(jìng)爭(zhēng)法ELISA
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 縮略語10-11
• 第一部分：b型流感嗜血桿菌多糖結(jié)合疫苗制備工藝的研究11-54
• 引言11-13
• 1 材料13-15
• 1.1 菌株來源13
• 1.2 主要試劑13-14
• 1.3 主要器材與儀器14-15
• 1.4 主要試劑配方見附錄215
• 2 方法15-33
• 2.1 菌種名稱及來源15
• 2.2 細(xì)菌發(fā)酵15-16
• 2.2.1 菌株復(fù)蘇15
• 2.2.2 菌種鑒定15-16
• 2.2.3 Hib菌種的發(fā)酵培養(yǎng)16
• 2.3 多糖制備工藝16-18
• 2.3.1 沉淀復(fù)合糖16-17
• 2.3.2 去核酸17
• 2.3.3 制備粗糖17
• 2.3.4 苯酚抽提去除蛋白17
• 2.3.5 超濾17
• 2.3.6 制備精糖17-18
• 2.4 Hib多糖的衍化18-21
• 2.4.1 衍化過程的Box-behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)18
• 2.4.2 Hib莢膜多糖衍生物的制備18-20
• 2.4.3 PRP多糖衍化率與結(jié)合率的關(guān)系探究20
• 2.4.4 Hib莢膜多糖-TT蛋白結(jié)合物的純化20
• 2.4.5 衍化率與結(jié)合率關(guān)系的重復(fù)性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證20-21
• 2.5 Hib-TT結(jié)合過程的優(yōu)化21-23
• 2.5.1 Hib多糖衍生物與TT結(jié)合實(shí)驗(yàn)的正交設(shè)計(jì)21
• 2.5.2 多糖衍生物的制備21
• 2.5.3 結(jié)合物原液的制備21-22
• 2.5.4 結(jié)合物的純化22
• 2.5.5 最高結(jié)合率的重復(fù)性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證22-23
• 2.6 檢測(cè)23-33
• 2.6.1 Hib多糖各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)23-25
• 2.6.2 Hib多糖衍生物與結(jié)合物相關(guān)檢測(cè)25-33
• 3 結(jié)果33-51
• 3.1 Hib多糖質(zhì)量鑒定33-35
• 3.1.1 鏡檢33
• 3.1.2 Hib多糖~1H-NMR譜33-34
• 3.1.3 Hib多糖相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)34-35
• 3.2 Hib結(jié)合相關(guān)檢測(cè)結(jié)果35-51
• 3.2.1 響應(yīng)面分析法優(yōu)化Hib多糖的衍化35-44
• 3.2.2 正交試驗(yàn)優(yōu)化Hib與TT結(jié)合的實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-51
• 4 討論51-54
• 第二部分 b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗的凍干及其多糖ELISA方法的定量檢測(cè)54-75
• 引言54-56
• 1 材料56-57
• 1.1 主要材料56
• 1.2 主要試劑56-57
• 1.3 主要器材與儀器57
• 1.4 主要試劑配方見附錄257
• 2 方法57-61
• 2.1 Hib凍干劑型的研究57-58
• 2.1.1 凍干保護(hù)劑的配制57
• 2.1.2 Hib結(jié)合物原液處理57-58
• 2.1.3 凍干原液的配制及分裝58
• 2.1.4 凍干58
• 2.1.5 凍干劑型的再研究58
• 2.1.6 凍干劑型的重復(fù)性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證58
• 2.2 Hib多糖間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立58-60
• 2.2.1 包被多糖抗原及多糖抗血清濃度的確定58-59
• 2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立及最低檢測(cè)線的確定59
• 2.2.3 精確度的確定59
• 2.2.4 批間精密度的確定59
• 2.2.5 方法應(yīng)用59-60
• 2.3 凍干劑型檢測(cè)60-61
• 2.3.1 鑒別實(shí)驗(yàn)60
• 2.3.2 高分子含量檢測(cè)60
• 2.3.3 多糖含量檢測(cè)60
• 2.3.4 成形率計(jì)算60
• 2.3.5 內(nèi)毒素含量檢測(cè)60
• 2.3.6 分子量大小檢測(cè)60-61
• 2.3.7 無菌試驗(yàn)檢測(cè)61
• 2.3.8 效力實(shí)驗(yàn)61
• 3 結(jié)果61-72
• 3.1 Hib凍干結(jié)合疫苗相關(guān)結(jié)果61-68
• 3.1.1 乳糖作為保護(hù)劑時(shí)相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)61-62
• 3.1.2 海藻糖作為保護(hù)劑時(shí)相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)62
• 3.1.3 右旋糖酐-40作為保護(hù)劑時(shí)相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)62-63
• 3.1.4 甘露醇作為保護(hù)劑時(shí)相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)63-64
• 3.1.5 兩種保護(hù)劑共同作用下Hib凍干結(jié)合疫苗相關(guān)檢測(cè)64
• 3.1.6 混合保護(hù)劑下重復(fù)性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證64-65
• 3.1.7 部分Hib凍干劑型外觀65
• 3.1.8 凍干劑型分子量大小的測(cè)定65-66
• 3.1.9 免疫雙擴(kuò)檢測(cè)66-67
• 3.1.10 無菌試驗(yàn)檢測(cè)67
• 3.1.11 內(nèi)毒素含量測(cè)定67
• 3.1.12 效力試驗(yàn)67-68
• 3.2 Hib多糖ELISA檢測(cè)方法的建立68-72
• 3.2.1 最適PRP-Ty包被濃度和最適Hib抗血清稀釋倍數(shù)68
• 3.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及最低檢測(cè)線68-69
• 3.2.3 間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法準(zhǔn)確性和批內(nèi)精密度檢測(cè)69-70
• 3.2.4 批間精密度及其與傳統(tǒng)化學(xué)法檢測(cè)的比較70-71
• 3.2.5 間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法的應(yīng)用71-72
• 4 討論72-75
• 總結(jié)和展望75-76
• 1 總結(jié)75
• 2 展望75-76
• 參考文獻(xiàn)76-80
• 綜述80-89
• 參考文獻(xiàn)86-89
• 附錄2 溶液配制89-96
• 攻讀碩士學(xué)位期間以第一作者發(fā)表的文章96
• 個(gè)人簡歷96-97
• 致謝97

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 蒲麗麗,劉寧,張英華,霍貴成;乳酸菌凍干保護(hù)劑及保護(hù)機(jī)理的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代食品科技;2005年01期

2 胡瑩;夏曉玲;黃海林;單斌;李豐良;黃云昆;劉曉莉;;昆明地區(qū)兒童下呼吸道感染流感嗜血桿菌分離株的耐藥性和血清分型研究[J];實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);2013年02期

  本文關(guān)鍵詞：b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗結(jié)合及凍干制備工藝相關(guān)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：251484