【摘要】：流行性感冒病毒是威脅人類健康的主要病原體之一,2009年四月底,新甲型H1N1 (A/California/7/2009)流感在墨西哥爆發(fā),隨即波及至一百多個(gè)國(guó)家。世界衛(wèi)生組織(WHO)于2009年6月11日將甲型H1N1流感大流行的預(yù)警提高至最高第六級(jí),這意味著流感病毒在新千年的第一次全球大流行。這株新甲型H1N1流感病毒經(jīng)重配形成,人群普遍缺乏抵抗力,感染者多為年輕人,一般兩三天以內(nèi)可傳至他人。目前該病毒仍在人群中對(duì)流感的監(jiān)控和防治是一項(xiàng)長(zhǎng)期艱巨且不斷具有新挑戰(zhàn)的任務(wù),對(duì)流感病毒及其疫苗的研究具有重大的公共衛(wèi)生學(xué)意義。接種疫苗是預(yù)防流感病毒的最佳途徑,傳統(tǒng)疫苗采用肌肉注射的方式接種。但流感病毒主要經(jīng)呼吸道感染,通過(guò)呼吸道黏膜進(jìn)入動(dòng)物和人體內(nèi),因而黏膜免疫在預(yù)防流感病毒感染的研究領(lǐng)域中顯得尤為重要。通過(guò)鼻腔接種流感疫苗可誘導(dǎo)局部黏膜免疫反應(yīng),分泌特異性sIgA,不僅能及時(shí)阻止感染,而且能更有效地提供交叉保護(hù)。佐劑具有增強(qiáng)疫苗免疫原性、優(yōu)化免疫應(yīng)答、減少提供保護(hù)性免疫所需的抗原量等優(yōu)點(diǎn),因此安全有效的流感病毒滅活疫苗黏膜佐劑將有助于增強(qiáng)流感疫苗的免疫效果。枸杞多糖(LBP)是從植物枸杞的果實(shí)中提取的多糖,能誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞增殖,調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的分泌,促進(jìn)抗體和補(bǔ)體形成,增強(qiáng)NK細(xì)胞活性,具有免疫增強(qiáng)作用。因此我們認(rèn)為枸杞多糖可能對(duì)黏膜接種甲流疫苗具有佐劑效應(yīng)。在本研究中,我們以不同劑量的甲型H1N1流感裂解疫苗(單價(jià)液)添加或不添加枸杞多糖佐劑分別滴鼻免疫BALB/c/小鼠,以僅免疫枸杞多糖和不接種疫苗的同齡健康小鼠作為對(duì)照,研究不同劑量甲流裂解疫苗的黏膜免疫效力以及枸杞多糖對(duì)其佐劑效力。用ELISA方法測(cè)定小鼠血清中IgG、IgG1、IgG2a抗體和小鼠鼻洗液中IgA抗體的滴度,用HI方法測(cè)定血清中抗體的滴度,以評(píng)價(jià)枸杞多糖對(duì)甲型H1N1流感病毒裂解疫苗黏膜免疫誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)抗體水平的影響。用Elispot方法檢測(cè)脾臟細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IFN-γ的情況,以評(píng)價(jià)小鼠體內(nèi)細(xì)胞免疫水平。二次免疫兩周后用致死量同源流感病毒攻擊小鼠,通過(guò)測(cè)定肺部病毒滴度、觀察小鼠體重丟失率及統(tǒng)計(jì)小鼠存活情況來(lái)評(píng)價(jià)添加或不添加佐劑的甲流裂解疫苗經(jīng)黏膜免疫小鼠后抗致死量同源病毒的保護(hù)效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,滴鼻接種高劑量甲流裂解疫苗組小鼠其血清中IgG水平高于低劑量組,對(duì)于相同劑量疫苗,枸杞多糖佐劑的添加可提高小鼠體內(nèi)IgG水平,表明LBP可以增強(qiáng)甲流裂解疫苗在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的體液免疫。通過(guò)對(duì)分型抗體的測(cè)定,結(jié)果發(fā)現(xiàn)單獨(dú)疫苗組和添加佐劑組均能在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生IgG1和IgG2a,所有組別IgG1抗體水平均略高于IgG2a,表明裂解疫苗在體內(nèi)誘導(dǎo)的體液免疫是Th1/Th2混合型的,且枸杞多糖能同時(shí)提高兩種分型抗體的滴度,其對(duì)Th1、Tb2型免疫均有增強(qiáng)作用。在較高劑量疫苗佐劑添加組中,我們檢測(cè)到—定量的IgA,說(shuō)明滴鼻途徑接種甲流疫苗誘導(dǎo)了局部粘膜免疫反應(yīng)。HI試驗(yàn)結(jié)果表明枸杞多糖能在體內(nèi)輔助甲流疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生更高水平的抗體。高劑量甲流裂解疫苗添加LBP佐劑組小鼠脾臟細(xì)胞分泌IFN-γ水平顯著高于其他組別,表明其在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)了較強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫反應(yīng)。小鼠抗致死量同源病毒攻擊的保護(hù)能力與接種疫苗劑量呈正相關(guān),且高劑量甲流裂解疫苗添加LBP佐劑組小鼠保護(hù)率達(dá)100%,枸杞多糖顯示出良好的佐劑效應(yīng)。因此,枸杞多糖可以作為黏膜佐劑增強(qiáng)甲流裂解疫苗的免疫效力。
[Abstract]:The influenza virus is one of the major pathogens that threaten human health. At the end of April 2009, the new H1N1 (A/ California/7/2009) flu broke out in Mexico and then spread to more than one hundred countries. The World Health Organization (WHO) raised the early warning of the influenza A (H1N1) pandemic to the highest level at the sixth level on 11 June 2009, which means the first global pandemic of the influenza virus in the new millennium. The new H1N1 influenza A virus has been reformulated, and the population is generally lacking in resistance, and most of the infected people are young people and can be transferred to others within two or three days. At present, the virus is still in the crowd, the monitoring and prevention of the influenza is a long-term and challenging task, and the research on the influenza virus and its vaccine has significant public health significance. The vaccine is the best way to prevent the influenza virus, and the traditional vaccine is administered by intramuscular injection. But the influenza virus is mainly infected by the respiratory tract and enters the animal and the human body through the respiratory tract mucosa, so that the mucosal immunity is particularly important in the research field of the prevention of influenza virus infection. Through the nasal administration of the influenza vaccine, the local mucosal immune response can be induced, the specific sIgA can be secreted, not only can the infection be prevented in time, but also the cross protection can be more effectively provided. The adjuvant has the advantages of enhancing the immunogenicity of the vaccine, optimizing the immune response, reducing the amount of the antigen required to provide the protective immunity, and the like, so the safe and effective influenza virus inactivated vaccine mucosal adjuvant can be used for enhancing the immune effect of the influenza vaccine. The lycium barbarum polysaccharide (LBP) is a polysaccharide extracted from the fruit of the plant of the plant, can induce the proliferation of lymphocytes, regulate the secretion of the cytokines, promote the formation of the antibody and the complement, enhance the activity of NK cells, and have the function of enhancing immunity. Therefore, we think that the lycium barbarum polysaccharide may have an adjuvant effect on the mucosal administration of the vaccine. In the present study, we add or not add Lycium barbarum polysaccharide adjuvant to BALB/ c/ mice respectively with different doses of the A/ H1N1 influenza lysis vaccine (monovalent liquid), to only immunize the Chinese wolfberry polysaccharide and the healthy mice of the same age who do not have the vaccine as the control, The mucosal immune efficacy and the effect of Lycium barbarum polysaccharide on the adjuvant of the vaccine were studied. The IgG, IgG1, IgG2a antibody and the titer of the IgA antibody in the mouse nasal wash were determined by the ELISA method, and the titer of the antibody in the serum was determined by the HI method. Cytokine IFN-1 was secreted by the spleen cells using the Eliot method in order to evaluate the level of cellular immunity in the mice. after two weeks of second immunization, the mice were attacked by a lethal amount of homologous influenza virus, and the titer of the lung virus was measured, To observe the loss of body weight and the survival of the mice, the protective effect of the anti-lethal dose of the vaccine after the administration of the mucosal immune mice was evaluated. The results showed that the level of IgG in the serum of the mice with high dose of high-dose methylprednisolone was higher than that of the low-dose group, and the addition of the adjuvant of the lycium barbarum polysaccharide could improve the level of IgG in the mice. It is shown that LBP can enhance the humoral immunity induced by the first-flow cracking vaccine in the mice. The results showed that the IgG1 and IgG2a could be induced in the mice and the level of IgG1 antibody in all groups was slightly higher than that of IgG2a, indicating that the humoral immunity induced by the split vaccine in the body was Th1/ Th2 hybrid. And the lycium barbarum polysaccharide can improve the titer of the two types of antibody at the same time, and has an enhanced effect on the Th1 and the Tb2 type of immunity. In the higher dose vaccine adjuvant addition group, we detected a quantitative IgA, indicating that the nasal route was inoculated with a vaccine to induce a local mucosal immune response. The results of HI test show that the lycium barbarum polysaccharide can induce a higher level of antibody in the body-assisted nail-flow vaccine. The level of IFN-1 in the spleen cells of mice with LBP adjuvant group was significantly higher than that of other groups, indicating that it induced a strong cellular immune response in the mice. The protective ability of the mouse anti-lethal homologous virus attack is positively correlated with the dose of the inoculated vaccine, and the protective rate of the mice with the high-dose alpha-flow cracking vaccine is up to 100%, and the lycium barbarum polysaccharide shows good adjuvant effect. Therefore, the lycium barbarum polysaccharide can be used as a mucosal adjuvant to enhance the immune efficacy of the first-flow cracking vaccine.
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2492783