【摘要】：目的優(yōu)化多細胞因子聯(lián)合誘導(dǎo)分離樹突狀細胞(DC)工藝,提高小鼠骨髓來源樹突狀細胞(BMDC)體外誘導(dǎo)分離效率。方法采用重組小鼠粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重組小鼠白細胞介素4(rmIL-4)、脂多糖(LPS)、重組小鼠腫瘤壞死因子α(rmTNF-α)和誘導(dǎo)時間為考察因素,未成熟樹突狀細胞(imDC)和成熟樹突狀細胞(mDC)獲得量為考察指標,采用Box-Behnken設(shè)計試驗,響應(yīng)面法分析并驗證試驗結(jié)果,并結(jié)合光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)分析BMDC形態(tài)、表面標志物等指標。結(jié)果響應(yīng)面優(yōu)化誘導(dǎo)imDC最佳誘導(dǎo)工藝rmGM-CSF為46 ng/mL、rmIL-4為24 ng/mL,誘導(dǎo)時間為6 d;imDC獲取量為(4.58±0.28)×10~6個,相對偏差為4.00%。誘導(dǎo)mDC最佳工藝LPS為1.4μg/m L、rmTNF-α為30 ng/m L,誘導(dǎo)時間為1 d;m DC獲取量為(4.21±0.15)×10~6個,相對偏差為3.80%。體外誘導(dǎo)5~7 d,可獲得足量的具有典型樹突狀的DC,流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)imDC較高表達CD11c(68.62%±2.3%),低表達CD86(37.95%±1.8%);mDC高表達CD11c(82.05%±1.6%)和CD86(90.34%±1.4%)。結(jié)論單因素實驗與響應(yīng)面優(yōu)化聯(lián)合優(yōu)化多細胞因子體外快速、高效誘導(dǎo)擴增DC,為進一步研究提供了工具。
[Abstract]:Objective To optimize the induction and isolation of dendritic cells (BMDC) from mouse bone marrow derived dendritic cells (BMDC) by the combination of multiple cytokines to induce the separation of dendritic cells (DC). Methods Recombinant mouse granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (rmGM-CSF), recombinant mouse interleukin-4 (rmIL-4), lipopolysaccharide (LPS), recombinant mouse tumor necrosis factor (rmTNF-1) and induction time were studied. The quantity of immature dendritic cells (imDC) and mature dendritic cells (mDC) was investigated. The results of the test were analyzed by Box-Behnken, and the results of the test were validated by means of optical microscope, electron microscope and flow cytometry. Results The optimal induction of rmGM-CSF was 46 ng/ mL, rmIL-4 was 24 ng/ mL, the induction time was 6 d, the amount of imDC was (4.58-0.28) and 10-6, and the relative deviation was 4.00%. The induced mDC optimum process LPS was 1.4. m u.g/ m L, the rmTNF-1 was 30 ng/ m L, the induction time was 1d, m-DC acquisition was (4.21-0.15) and 10-6, and the relative deviation was 3.80%. In vitro induction of 5 to 7 days, a sufficient amount of DC with a typical dendritic shape was obtained, and the expression of CD11c (68.62%, 2.3%), low expression of CD86 (37.95%, 1.8%), mDC high expression CD11c (82.05%, 1.6%) and CD86 (90.34%, 1.4%) were detected by flow cytometry. Conclusion Single factor experiment and response surface optimization combined optimized multi-factor in vitro rapid and efficient induction of DC, and provided a tool for further research.
【作者單位】： 泉州師范學(xué)院;福建省海洋藻類活性物質(zhì)制備與功能開發(fā)重點實驗室;福建省銀豐干細胞工程有限公司;福建醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院;泉州醫(yī)學(xué)高等�？茖W(xué)校;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31072236) 福建省中青年教師教育科研項目(JAT160409) 福建省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)計劃項目(201610399044)資助
【分類號】：R392

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本文編號：2487143