【摘要】：調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cells, Treg)是一類通過抑制T細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子分泌進(jìn)而抑制機(jī)體免疫反應(yīng)、防止持續(xù)炎癥反應(yīng)攻擊健康組織的T細(xì)胞在免疫病理、移植物耐受、保持自身抗原的耐受性以阻止自身免疫反應(yīng)和維持機(jī)體免疫平衡方面,Treg均發(fā)揮著重要的作用。Treg細(xì)胞功能缺陷可導(dǎo)致人類多種自身免疫性疾病,如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、重癥肌無力等。Treg細(xì)胞包括CD4+Treg. CD8+Treg、NKTTreg和雙陰性Treg細(xì)胞四大類。其中,CD4+CD25+Treg細(xì)胞是目前研究最為廣泛的Treg細(xì)胞。CD4+CD25+Treg細(xì)胞除表達(dá)CD25分子外,還表達(dá)一系列免疫調(diào)節(jié)相關(guān)的標(biāo)志物,如細(xì)胞表面的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(Cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4, CTLA-4)、糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子受體(Glucocorticoid induced tumor necrosis factor receptor, GITR)家族相關(guān)基因和細(xì)胞核內(nèi)的叉頭／翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子P3(Forkhad box P3, Foxp3)。Foxp3是Treg細(xì)胞維持自身免疫平衡所必需的分子。體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)都已證明,轉(zhuǎn)化生長因子β1(Transforming growth factor β, TGF-β1)可誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞表達(dá)Foxp3,形成具有免疫抑制功能的Treg細(xì)胞。 丫δ T細(xì)胞因其表面表達(dá)由γ鏈和δ鏈組成的T細(xì)胞受體(T cell receptor, TCR)而得名,在抗原識別和免疫應(yīng)答中具有特殊的作用。γδT細(xì)胞主要分布于皮膚、小腸、肺和生殖器官等粘膜及皮下組織,而在人類外周血中,TCR γδ約表達(dá)于0.5%-10%的CD3+T細(xì)胞表面。γδ T細(xì)胞又根據(jù)δ鏈的不同分為V81T細(xì)胞和V82T細(xì)胞兩種類型。Vδ1T細(xì)胞多位于小腸上皮組織中,是小腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(Intestine intraepithelial lymphocytes, iIELs)的重要組成部分,而其在外周血中的數(shù)量僅為γδT細(xì)胞總量的20%；V82T細(xì)胞主要見于外周血,約占γδT細(xì)胞總量的70%。Vδ2T細(xì)胞具有顯著的細(xì)胞毒性作用和對微生物重復(fù)感染的記憶反應(yīng)功能。由于人類外周血中V81T細(xì)胞含量較少,并且體外擴(kuò)增存在一定難度,因此對外周血中Vδ1T細(xì)胞的生物學(xué)特性和功能知之甚少。iIELs主要位于小腸絨毛柱狀上皮內(nèi),為一類組織松散的浸潤性淋巴細(xì)胞。iIELs由于數(shù)量眾多并在粘膜免疫防御中具有重要作用,因而成為IELs研究的熱點(diǎn)之一。iIELs的表型和功能呈現(xiàn)多樣性,依據(jù)表面TCR組成的不同分為αβ T細(xì)胞和γδ T細(xì)胞。前者具有顯著的細(xì)胞毒活性,因而參與小腸粘膜的免疫應(yīng)答反應(yīng)；后者的功能尚未完全明確,但已有的研究顯示該細(xì)胞功能具有多樣性,包括免疫防御、細(xì)胞毒活性等。而最近更多的研究顯示,γδT細(xì)胞具有免疫調(diào)節(jié)潛能。因此,本文將針對這一科學(xué)問題展開相關(guān)研究。 本研究旨在驗(yàn)證人外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood monouclear cells, PBMCs)來源的Vδ1T細(xì)胞以及小鼠iIELs來源的γδ T細(xì)胞是否具有免疫調(diào)節(jié)功能。根據(jù)以上研究內(nèi)容,本論文分為兩部分。第一部分通過在有或無外源性轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)的情況下,檢測抗TCR Vδ1單克隆抗體(monoclonal antibody, mAb)擴(kuò)增的、人PBMCs來源的V81T細(xì)胞內(nèi)Foxp3的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,即使無外源性TGF-β1,抗TCR Vδ1mAb亦可擴(kuò)增獲得大量Foxp3+V81T細(xì)胞,且Foxp3分子在V81T細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)檢測抗TCR Vδ1mAb擴(kuò)增的PBMCs上清中是否存在TGF-β1。結(jié)果顯示,培養(yǎng)上清中存在較高水平的TGF-β1。應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)(Fluorescence-activated cell sorting, FACS)檢測發(fā)現(xiàn)V81T細(xì)胞是TGF-β1的主要來源細(xì)胞,且V81T細(xì)胞表達(dá)較高水平的TGF-β1受體(CD105)。接下來我們檢測了Foxp3+Vδ1T細(xì)胞所表達(dá)的其它Treg細(xì)胞相關(guān)的表面標(biāo)志物和細(xì)胞因子。結(jié)果顯示,V81T細(xì)胞可表達(dá)GITR、CTLA-4、CD25等Treg細(xì)胞常見的表面分子和白介素-10(interleukin-10, IL-10)、TGF-β1。最后我們應(yīng)用CFSE方法檢測發(fā)現(xiàn), CD25high V51T細(xì)胞對CD4+T細(xì)胞的增殖具有顯著的抑制作用。以上研究結(jié)果提示,Foxp3+Vδ1T細(xì)胞是一種Treg細(xì)胞。這為某些腸上皮的炎癥性疾病的發(fā)病和治療、移植免疫免疫耐受機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ)。 本論文的第二部分通過分離獲得C57BL/6J小鼠的iIELs,經(jīng)TGF-β1和γδTCR抗體(antibody, Ab)共同作用后,應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測γδ T細(xì)胞內(nèi)Foxp3分子的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,TGF-β1和γδ TCR抗體可以共同誘導(dǎo)Foxp3+γδ T細(xì)胞的產(chǎn)生。同時(shí),我們應(yīng)用CFSE染色的方法檢測發(fā)現(xiàn),Foxp3+γδ T細(xì)胞對CD4+T細(xì)胞的增殖具有顯著的抑制作用。以上結(jié)果表明,TGF-β1和γδ TCR抗體在體外能夠共同誘導(dǎo)小鼠的iIELs產(chǎn)生Foxp3+γδ T細(xì)胞,并且該細(xì)胞具有免疫調(diào)節(jié)功能。這為闡明TGF-β1在小腸上皮免疫調(diào)節(jié)性γδ T細(xì)胞產(chǎn)生中的作用,以及某些小腸自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制和治療提供了線索。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R392

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2472886