發(fā)布時間：2019-05-07 08:18

【摘要】：目的： 掌握小鼠嗜酸性細胞CCR3基因RNA干擾慢病毒載體的構建方法，通過慢病毒載體的構建，降低CCR3基因在嗜酸性細胞中的表達，從而為探討阻斷Eotaxin/CCR3路徑對嗜酸性細胞凋亡及其在骨髓、外周血及局部組織的募集、遷移及成熟過程的機制變化影響創(chuàng)造條件。 方法： 利用公用網站按照RNAi序列設計原則，設計RNAi靶點序列并合成靶序列的Oligo DNA，退火形成雙鏈DNA，與經MluI、SacⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠ和XhoⅠ進行酶切后的pLVX-shRNA2-m載體連接產生shRNA慢病毒載體。應用shRNA慢病毒載體轉染293T細胞及嗜酸性細胞細胞，，測定病毒滴度，Q-PCR鑒定CCR3基因在嗜酸性細胞中的下調作用。 結果： 成功構建了shRNA-mCCR3慢病毒載體，經測序與設計合成的靶向鏈完全一致。熒光顯微鏡下觀察293T細胞感染效率大于90%，病毒滴度為4X108TU/ml；Q-PCR測定對嗜酸性細胞CCR3基因沉默效率為86.7%。 結論： 成功構建了小鼠嗜酸性細胞CCR3基因RNAi慢病毒載體，為后續(xù)的體內外功能學試驗創(chuàng)造了條件。
[Abstract]:Objective: to study the construction of lentivirus vector interfering with CCR3 gene RNA in mouse eosinophil cells, and to reduce the expression of CCR3 gene in eosinophil cells by constructing lentivirus vector. In order to explore the effect of blocking Eotaxin/CCR3 pathway on eosinophil apoptosis, recruitment, migration and maturation of eosinophils in bone marrow, peripheral blood and local tissues. Methods: according to the principle of RNAi sequence design, the public websites were used to design the RNAi target sequence and synthesize the Oligo DNA, annealing of the target sequence to form double-stranded DNA, and MluI,Sac 鈪

本文編號：2470913