【摘要】：人類(lèi)單純皰疹病毒Ⅱ型(Herpes Simplex Virus type2, HSV-2)是一種雙鏈DNA病毒,為生殖器皰疹的主要病原體,感染率高,但由于其感染常表現(xiàn)為潛伏性,為診斷和治療帶來(lái)困難。其主要藥物為阿昔洛韋,但治療反復(fù)性高,難以治愈,且容易產(chǎn)生耐藥性,故需要開(kāi)發(fā)更多抗感染藥物。為探索4-苯乙烯磺酸馬來(lái)酸酐共聚物(PSM)這類(lèi)高分子化合物的抗HSV-2感染效果,進(jìn)行了細(xì)胞學(xué)和動(dòng)物學(xué)水平的研究。 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果如下： 1.構(gòu)建重組ICP10啟動(dòng)子的pGL4熒光酶素報(bào)告基因質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞。24h后,加入濃度為60、20、6.67、2.2、0.74、0.25、0.08μg/mL的PSM對(duì)Vero細(xì)胞進(jìn)行給藥,再使用50ul HSV-2(MOI=1)感染Vero細(xì)胞,使用Luciferase技術(shù)分析ICP10-啟動(dòng)子的激活情況,表明PSM對(duì)病毒復(fù)制的影響。結(jié)果可見(jiàn)PSM給藥濃度與luciferase熒光強(qiáng)度具有相關(guān)性,說(shuō)明PSM對(duì)HSV-2感染Vero細(xì)胞具有一定保護(hù)作用。 2.培養(yǎng)HEC-1-A細(xì)胞,待匯合率為90%左右時(shí),加入濃度為60、20、6.67、2.2、0.74、0.25、0.08μg/mLPSM后使用50μl HSV-2(MOI=1)感染細(xì)胞,24h后使用In-Cell Western技術(shù)測(cè)定HSV-2的gD蛋白表達(dá)水平(以β-catenin蛋白為內(nèi)參)。結(jié)果可見(jiàn)PSM給藥濃度與gD蛋白表達(dá)水平呈一定比例,說(shuō)明PSM對(duì)HSV-2感染HEC-1-A細(xì)胞具有保護(hù)作用。 3.建立小鼠HSV-2陰道感染模型,使用10μl濃度分別為5%和1%的PSM預(yù)給藥(對(duì)照組為HSV-2感染組),再進(jìn)行小鼠HSV-2感染,觀察4-14天內(nèi)小鼠外陰部感染情況,比較PSM給藥的效果。結(jié)果顯示,兩種不同濃度的給藥組感染率均顯著低于對(duì)照組(p0.001)。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明,PSM對(duì)HSV-2在體或者離體感染具有一定保護(hù)作用,而其作用機(jī)制可能為影響病毒入胞,這需要進(jìn)一步進(jìn)行探討。
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【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R373

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本文編號(hào)：2470779