【摘要】：目的建立一種針對(duì)登革2型病毒(DENV-2)的快速、靈敏、特異的檢測(cè)方法。方法從Gen Bank下載105株DENV-2病毒毒株全基因序列,應(yīng)用生物軟件Bioedit進(jìn)行比對(duì)分析篩選出保守序列,在保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異引物和探針,建立檢測(cè)DENV-2的TaqMan熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法。結(jié)果該方法檢測(cè)靈敏度達(dá)到102copies/μL;特異性驗(yàn)證中除登革2型病毒有明顯擴(kuò)增外,與墨累谷腦炎病毒、西尼羅病毒、蜱傳腦炎病毒、登革病毒1、3、4型、黃熱病毒和科薩努爾森林病毒、乙型腦炎病毒均無(wú)交叉反應(yīng)。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法的組間和組內(nèi)的變異系數(shù)(CV)均2%。對(duì)人工感染DENV-2的87只蚊蟲標(biāo)本進(jìn)行比對(duì)實(shí)驗(yàn),結(jié)果熒光定量RT-PCR檢測(cè)出56份陽(yáng)性,傳統(tǒng)RT-PCR只檢測(cè)出16份陽(yáng)性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ~2=37.908,P=0.000)。結(jié)論 TaqMan熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)DENV-2,特異性強(qiáng)、敏感性高。
[Abstract]:Objective to establish a rapid, sensitive and specific method for the detection of dengue 2 virus (DENV-2). Methods the whole gene sequence of DENV-2 virus strain was downloaded from Gen Bank, and the conserved sequence was screened by biological software Bioedit. The specific primers and probes were designed in the conserved region. To establish a TaqMan quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) method for the detection of DENV-2. Results the sensitivity of this method was up to 102copies/ 渭 L; In addition to the marked amplification of dengue 2 virus, it is associated with Muriya encephalitis virus, West Nile virus, tick-borne encephalitis virus, dengue virus 1, 3,4, yellow fever virus and Cosanur forest virus, There was no cross reaction between Japanese encephalitis virus and Japanese encephalitis virus. The repeatability test results showed that the coefficient of variation (CV) of the method was 2% among groups and within groups. A comparative experiment was conducted on 87 mosquito specimens infected with DENV-2. The results showed that 56 samples were positive by fluorescent quantitative RT-PCR and 16 positive by traditional RT-PCR (蠂 ~ 2 ~ 2 ~ 3. 908, P < 0. 000). The results showed that there was no significant difference between the two groups (蠂 ~ 2 ~ 2 ~ 2, P < 0. 008). Conclusion TaqMan fluorescence quantitative RT-PCR method has high specificity and sensitivity in detecting DENV-2,.
【作者單位】： 貴州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院現(xiàn)代病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室;貴州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院勞動(dòng)衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生學(xué)教研室;貴州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;
【基金】：貴州省科技廳基礎(chǔ)平臺(tái)建設(shè)項(xiàng)目(黔科平臺(tái)[2012(4006)]) 貴州省社會(huì)發(fā)展科技公關(guān)項(xiàng)目(黔科合SY字[2009]3056)
【分類號(hào)】：R3416;R373.33

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本文編號(hào)：2463880